文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
内脏与皮下脂肪细胞差异蛋白的筛选及CGI-150结构/功能的初
步研究
姓名:李晓华
申请学位级别:博士
专业:内科学(内分泌及代谢病)
指导教师:罗敏
20050501
鸯衅学位论文使用授权声明学位论文独创性声明基翔;里堡圭:蒸、基朝:、使疆学佼论文豹麓建,学校有本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究残暴;据我嚣翔,涂文字已经淀麓孳踬缒也炫郝畚牟话骄鋈胍丫发表绒撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文孛撵了明殡说明势表示谢意。权保留学位论文并向国家主管部门或其指寇机构送交论文的电子版和娥质版。寿蔽将学位论文鼷予雾纛裂嚣鹣豹少量复裂莠凳诲论文送入学校强书镄被查阅。肖权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。裔权将学位论文的标题和摘溪汇绽出版。绦密豹学经论文在解密鼷逡矮奉规定。穆豢签名:学位论文作者签名导师签名嚣藕:
麦鞋与皮下艚膀缀瞻差异蛋盘的籍选及结构/功能的初步研究孛文攘要近年来,随着肥胖及肥胖相关疾病发病率的撤增,以及对脂肪组织功能认识的深入,胤痉熘绨蹙恳殉晌H鹊恪j俨萌衔狝塞薅缝织莠单纯懿糍爨穗存组织,逐曩有强大的代谢及内分泌功能,而且脂肪细胞的数目在戚年人也并非一成不变,脂肪组织仍保留着具肖分化能力的前脂肪细胞,在中枢及外周的调控下,能不断分化产缴新懿呔ぷ赫铡E枰咽谴仞尾斓智恕鳌耱暴痍、嚣,舀疯等疾痰公谈豹重要危险羧索,德脂肪组织在不同部位堆积的危害性却并不相同,即不同部位的脂肪组织存在掰盟的肄质性。在体懑相同的肥胖情况下,脂肪组织在内脏堆积较在皮下堆积更易于发生相关瞧疾瘗,危辫往更为严羹。霾我决定鼹黯笼害程度弱莠裴跫荩傣瓣,嚣是器糖缀缀在内脏的区域性分布。现已发现多个与脂肪细胞的分化、凋亡、糖脂代谢及内分泌功能相关的基因在不同部位的脂肪组织之间表达水平存在明显差异。但我们知道蛋臼质孝蹙舞麓孛魏行生耪学功麓豹主要分子,毳摹究菜弹绥黪夔功戆其蛋邑豪达谱笈搀供矮廒接最可靠的信息。目前虽已证实多种蛋白的表达水平在不同部位的脂肪组织之间存在麓异,但是这些差异还适不能解释内脏脂肪与皮下脂肪细胞在生妖分化、代谢及内本磷究裁用援囱霞缠学的援心投术一双两电泳及艨谱技术建立了阁~个体懿入漆簸及蛴肫は瞒胗风灰艿幕科黪咀员淼洌な盗巳怊膑鏊栌肫は码苍诘鞍椎水上存在明照藏舁,通过质谱分析鉴定褥到了六种在两缀之间表达有鼹著差髯的缀生长分化、信号转导、能登代谢等方面。与胰岛素敏感性、脂类代谢綮乱以及细胞的分化调控有密切关系。蛋囱馥在不弱部位呔橹泶镬嗌系牟幻疲梢愿玫逆事鼯膊与部位鹚关拣代潦功煞粢熊瓣关系。分泌功襞方蘑懿不曩。錾戆蒺冥蛋自豹簿选龟藏为当今弱疆究燕点。蛋自缝学约诞生及成熟为我们从整体水平在复杂多样的鬣白网络中寻找差异蛋白提供了有效的搬术囱腰,它秩寂⑻翘錝晕娴鞍,,桓龉︾芪粗5牡白訡。U饬┴寐韭渡婕柏夔慧手段。上游第二医科大学级博士磺究生学位论文
系。我们还应用生物信息学技术对的结构恸能进行了一系列分析。结果提示对功能未知蛋白颐抢肦狿和荧光际酰な盗吮嗦敫玫鞍的基因其水平在内脏脂肪细胞的表达明显低于皮下脂肪细胞,与双向电泳的蛋白差异结果相一致,且有着广泛组织的分布,在脂肪细胞的分化过程中其域的预测提示:在氨基酸之间有一个完整的醛酶,的域,很可能具有同样的生理功能。为避一步澄清缓自的功能,本研究克隧了表达蛋自的基闲并且采用麓便、糍效的原核表达及其缝化系统,获得了表达量商,可漆且纯度高的融合蛋白一3醪降奶逋馍锘钚圆舛ㄌ崾靖玫鞍拙哂欣嗨朴鐶彗默—最后,我们构建了在舆核表达载体,并成功进行了甃赴奈榷ㄗH荆本萋髯究在蛋自缀学东平对嗣一令髂疼莲与疫下鼹肪纲藏耱差簿蛋鑫邋嚣了拣选,获德了与胰岛豢信号转导、脂类代谢等功能相关的差异蛋白,以及一个功能未知的蛋白,利用生物信息学对爱白§蹙俊5比唬獾娴白栽诓幌课籰舞赫经绥表达爨主豹差舞与鄯整褪关性我澍功麓紊关键谲:肉照与皮下§鹭薅差异蛋自虞表达璺镄呕佳Х烨埽Α臁莘质诿的表达水平没有明显规律性的改变,说明该蛋白与脂肪细胞的分化没有明显的关该蛋白没有明显的信号肽和跨膜域,定位于胞浆。具有多个蛋白修饰位点,个蛋白激酶姿峄坏恪个酪蛋白激酶磷酸化位点,说明该蛋白可能接受多种信号的调控。该蛋白序列在其它物种之间,结构高度保守,%,表明蛋白在生物体内可能具有重要的生理功能。功能功能域,。而在氨基酸序列与能,在还原畿谷髋甘胶存在下,可将甲基乙二醛乖H樗峁洒深入研究蛋囱在粪核细脆中的生理作带打下基础。避行了结构/功能的分析,获得融合蛋白并作了扔步的功乱之删的关系还需深入大攫的研究,以便为进一步理解骺肪组织