文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
嗜酸性粒细胞增多症中Ⅲ型酪氨酸激酶受体基因
(PDGFRα,PDGFRβ,c-KIT,FLT3)的突变研究
姓名:崔静
申请学位级别:硕士
专业:内科(血液学)
指导教师:陈赛娟
20050501
气纵日圳:竺印蕉益程韵学位论文独创性声明学位论文使用授权声明日捌:生蓝本人所呈交的学位论文是我存导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确说明并表示谢意。本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学传论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。作者靛名:日划:学仲论文作者签名导师签名
嗜酸性粒细胞增多症中屠野彼峒っ甘芴寤,,狵,耐槐溲芯中文摘要嗜酸性粒细胞属于髓系细胞,是由髓系干细胞分化而来。外周血嗜酸性粒细胞计数增高一般是与反应性因素或骨髓的克隆性疾病有关。在克隆性嗜酸性粒细胞增多的患者中,通常有造血干细胞的异常,但是嗜酸性粒细胞本身不一定是恶嗜酸性粒细胞增多常发生在伴有湃旧逡孜坏墓撬柙鲋承约膊中,染色体易位常累及到—,定位克隆发现血小板衍生生长因子受体基因是主要的受累基因,它与其伙伴基因形成融合基因。所有这些与形成融合基因的伙伴基因的序列内均有一些特殊的结构域,使得不依赖其配体而形成受体二聚体,并发生自身磷酸化,从而使酪氨酸激酶持续激活。近年来,人们在一些慢性嗜酸性粒细胞白血病褪人嵝粤O赴龆综合征幕颊咧蟹⑾号染色体屑淙笔Р恢志哂谐中っ活性的一诤系鞍住U庑┫窒筇崾狙P“逖苌ひ蜃邮芴宓某续激活可能与嗜酸性粒细胞增多症的发生有关。本课题着重探讨嗜酸性粒细胞增多症的分子病因,在⑿允人嵝粤O胞增多症患者中,我们用聚合酶链反应恢苯硬庑蚍ǘ訧型酪氨酸激酶受体家族的成员包括琍琧和进行了基因的突变筛查。通过对这些基因的突变热点区的筛查,我们除了检测到狵基因的已知蚉蛏系囊桓鐾逋槐渫猓乖谝焕齋瘟朴行У脑⑿允酸性粒细胞增多症患者中发现了虵男滦问降难≡裥约羟凶B急尽在≡裥约羟凶B急局校庀宰亩Jг斐稍亩量蚣艿母谋洌罩密码子提前出现,从而产生了荒┒饲⑸谋涞慕囟绦偷鞍住娜中式的选择性剪切转录本也同样发生阅读框架的改变,产生截短型蛋白。在的三种转录本中,~种已经在数据库中被报道过,登录号为,是性克隆的组成部分。
由第号内含子的部分序列迦氲酵庀宰屯庀宰涠纬桑为了探讨选择性剪切的分子机制,我们分别对虵虻幕蜃上的相应区域进行了扩增并测序。我们在基因的内含予和内含子上分别找到一个点突变,形成疶和疓杂合子。通过对该蔚目寺〖测序鉴定,我们发现这两个点突变发生在同一条染色体上。我们进一步将野生型和突变型畏直鸸菇ǖ絧—真核表达载体中,并转染体转染的细胞株表达两种形式的,测序鉴定一种是正常形式,一种是缺失了第号外显子的异常形式。我们初步认为虻哪诤子和内含子上的点突变可能引起选择性剪切。另外,由于在基因组水平上没有检测到突变,我们推测可能是一些剪切因子参与的选择性剪切。本研究发现的选择性剪切转录本产生的截短蛋白缺失了正常转录本的荒┒饲WB急镜恼舛胃缓劝彼岷透彼岬腸一末端区能够对激酶的活性产生负调控作用。因此,我们推测难≡裥约羟凶B急究赡芤激酶的持续激活,而这也有助于解释治疗这例患者具有很好的疗效。从以上研究,我们认为血小板衍生生长因子受体和的激活与嗜酸性粒细胞增多非常相关。所有引起ê蚉っ富钚愿谋涞幕蛞常如一融合基因,蛑嘏牛约氨臼笛榉⑾值腜的选择性剪切转录本都可能是嗜酸性粒细胞增多症的分子病因。而具有持续激酶活性的￡和如何引起髓系干细胞向嗜酸粒细胞过度分化还有待于进一关键词:嗜酸性粒细胞增多症,发病机制,屠野彼峒っ甘芴澹琍位基因另外两种转录本是我们新发现的,一种是丢失了的外显子,另一种是丢失了的外显子同时在外显子和外显子之间插入了第号内含子的部分序列和细胞株以获得对应的,—峁崾綪槐步研究。基因,狵基因,基因上海第二医科大学硕士学位论文
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引言嗜酸性粒细胞属于髓系细胞,是由髓系于细胞分化而来。正常成人外周血嗜酸性粒细胞为白细胞分类计数的%,其绝对值为.~疞苯蛹剖ḿ扑,称为嗜酸性粒细胞增多。嗜酸性粒细胞增多可与多种疾病相关,特别是