文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
骨髓基质细胞移植治疗帕金森病大鼠模型的实验研究
姓名:叶民
申请学位级别:博士
专业:神经病学
指导教师:陈生弟
20050430
储獬:弘炉砺◇’午埘学位论文独创性声明学位论文使用授权声明本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确说明并表示谢意。本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。‘。。。。。。。‘‘学位论文作者签名:导师签名:炖级日期:日期
骨髓基质细胞移植治疗帕金森病大鼠模型的实验研究的治疗方法——移植治疗取得了快速发展。通过移植干细胞替代受损本课题研究内容涉及盏挤只I窬赴蹦艿难芯俊琍是中老年人中枢神经系统较常见的变性疾病,主要病变部位在黑质和纹状体,表现为震颤、肌强直、运动减少、姿势和平衡障碍,使病人的生活质量受到严重影响。在治疗策略中,近年来随着移植生物技术的成熟及运用,一种新干细胞根据其来源可分为胚胎于细胞和成体干细胞。骨髓基质细胞珺羌改昵安疟蝗啡系某商甯上胞,这种细胞具备干细胞的基本特点。利用邢赴瘟坪基因治疗的研究近年开展得越来越广泛,但对岣坏纳镅特征以及赴浦仓瘟芇饔没频难芯磕壳吧胁还簧钊搿置诙嘀稚窬Q蜃拥难芯俊⒁约袄肂为细胞载体转染虻难芯浚⒃谏鲜鲅芯抗ぷ骰∩瞎鄄炝颂逋庠び因治疗的作用机理进行了初步研究。第一部分谔逋庥盏挤只晌I窬赴难芯俊Mü究成年大鼠盏挤只I窬Q赴煌姆椒ǎ罢宜神经细胞分化的最佳条件。本部分实验取纯度较高的ü中文摘要帕金森病’的细胞,重建神经功能区和传导通路是近年治疗学研究的重点。导的浦仓瘟芇笫竽P偷牧菩В⒍訠细胞治疗和基本课题分成四个部分:上海第二医科大学博士学位论文
供实验依据。本部分实验取较高纯度的信嘌ü齊不同的神经营养因子诱导法和抗氧化剂诱导法,进行抗巢蛋白、神经元特异烯醇化酶⑸窬褐氏宋嵝缘鞍、酪氨酸羟化酶免疫细胞化学染色,观察相应的阳其分泌规律,为进一步探讨瘟芇笫竽P偷淖饔没铺纳锨逡汉拖赴鞍字蠫暮俊Mü齊ḿ觳用ㄔ谂嘌天以后的培养液和细胞蛋白中均可检测到第三部分蛟谔逋馀嘌拇笫驜中的表达。质体法转染包装细胞赴票妇哂懈腥净钚缘腁狽病毒粒性细胞数。研究发现抗氧化剂诱导法分化诱导快,而神经营养因子诱导法分化诱导效率高,诱导后细胞生长状态明显好于前者,各种神经营养因子联合作用影响脑鲋澈头只第二部分大鼠置诮褐氏赴葱陨窬Q蜃拥难究。研究芊穹置诮褐氏赴葱陨窬Q蜃—虴ǎ直鸫觤拖赴鞍姿讲舛ㄌ逋馀嘌显示在水平,杏蠫谋泶铩T诘鞍姿剑,并随着时间的延长,培养液和细胞蛋白中浓度明显升高。因此哂蟹置贕哪芰Γ赴置诳赡苁苤芪Щ境和自身生长状况的影响,其分泌是非持续性的。浓度的升高不仅与赴吭黾佑泄兀褂胂赴旧矸置谀芰Φ脑銮为获得高效表达基因的骨髓基质细胞,本部分实验采用分子克隆技术,构建携带虻南俨《靥澹弥有关。上海第二医科大学博士学位论文
予,用病毒上清液感染原代培养的⒂妹庖呦赴Х椒/唤ú《局嬉焊腥綛,获得了表达粜缘墓撬杌氏赴粜月试ァ亦证实细胞上清液中有特异性的醮鱿帧1静糠质笛榻崧凼侵刈橄第四部分经神经营养因子诱导的大鼠约白H基因的直鹨浦仓瘟芇锬P汀1臼验分为两部分,第一部分探讨经神经营养因子诱导只阳性的神经干细胞后,移植治疗大鼠模型的疗效及作用机制。通过对细胞移植后大鼠模型行为学、免疫组织化学的研究发现:盏挤只蒼粜缘纳窬上赴瘟芇P偷牧菩大鼠模型。结果表明:在移植治疗的前鲈拢;蜃榈牧菩比未转基因组的疗效好;神经营养因子洳荒茉黾覦苌窬元的数量,但可能增强了残存的能神经元的功能,使动物旋转次数明显减少,证明赑闹瘟浦杏幸欢ǖ淖饔谩自身分泌多种神经营养因子也可能与其疗效有关。因此,侵瘟检测阳性细胞。用检测转染。腂细胞上清液。结果经内切酶酶切鉴定和庑颍玫搅诵蛄姓返闹刈,感染赴胁《镜味炔舛ǎ縨《局嬉嚎纱病毒携带的蚰芄辉贐中表达,并能分泌到细胞外。总体好于未诱导的椋傲阶榈牧菩Ь糜谏硌嗡椤5二部分利用转染含俨《驹靥宓紹,并进行细胞移植治疗理想的供体细胞。丶蔧骨髓基质细胞帕金森病胶质细胞源性神经营养因子治疗×上海第二医科大学博士学位论文
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