文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
应用cDNA微阵列技术筛选胃癌相关基因的研究
姓名:张晓青
申请学位级别:博士
专业:外科学(普通外科)
指导教师:朱正纲
20050501
上海第二医科大学博士学位论文应用微阵列技术筛选胃癌相关基因的研究普通外科学张晓青刘炳亚教授燕敏教授陈军教授林言箴教授本课题受以下国家科技部“敝卮笞ㄏ罨鹱手胃癌、肺癌相关基因的克隆与功能鉴定生物芯片在胃癌研究中的应用院业研究生导师组成员瑞金医院朱正纲教授年专师医导土海第一基,:学博士学垃论文
作者鎏名:嵫导臌:缘孤礴芎与学位论文作者签名日期:塑坚:￡学位论文独创性声明学位论文使用授权声明本人所垦交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确说明并表示谢意。本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于菲赢利日的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。上海第一医千笱Р┦垦宦畚
应用微阵列技术筛选胃癌相关基因的研究摘研究背景与目的:胃癌的发生、发展是一个复杂的多基因参与、多阶段的动态过程。从转录组水平更好地理解其分子本质对改进诊断、治疗方法,改善预后极有裨益。微阵列技术是当前基因表达谱研究最为高效的技术之一。本研究拟充分利用这一技术,结合不断更新的生物信息学手段和资源,从转录组水平研究胃癌分子本质的材料与方法:收集上海第二医科大学瑞金医院年轮月间例行胃癌根治术患者的原发性胃癌组织及远离肿瘤的切缘正常胃粘膜标本,抽提总聘微阵列表达谱芯片杂交,筛选建立胃癌与正常粘膜的差异基因表达谱。对差异表达基因进行注解分类、系统聚类,并对其参与的异常信号传导通路等进行生物信息学分析。应用荧光实时定量兔庖咦橹旧ǚ对差异表达基因进行验证及蛋白定位。同法建立不同特征胃癌π汀⒚致图坝校蘖馨徒嶙R各自差异基因表达谱,结合胃癌总体基因表达谱,应用维恩图解、方差分析进行组间比较。对胃癌高表达基因分泌型磷蛋白τ肣虸技术分析其表达与临床病理特征的关系及进行生存分析。对另一个胃癌高表达基因捎糜ü舛縋及法检测谖赴┫赴辍⒃酒笛榕涠员瓯炯靶率占例慢性胃炎患者胃粘膜标本中的表达。构建婧吮泶镌靥錺猅,取泶锼阶畹偷腗细胞系为研究对象,应用脂质体介导的基因转染技术,建立稳定表达膒赴辏ü逋獾那ㄒ啤侵袭试验和体内的裸鼠人胃癌成瘤及转移模型,观察蜃H径訫细胞增殖、迁移、侵袭、转移力的影响。结果:以%〕鑫赴┳橹中上调基瞝/泶镄蛄斜昵个。除了原癌基因的异常激活,上调的基因主要参与了血管形成、细胞外基质重建、细胞粘附、细胞信号传导及细胞周期调控等生物过程;而下调的基因大多是那些在细胞的外源性生物代谢、免疫防御、正常消化功能及内环境稳定等机体正常生理过程中要差异及差异表达基因的相互关系,寻找潜在的分子诊断指标和治疗靶标。每例患者的肿瘤与正常粘膜荧光探针,与人个;表达下调基因上海第二医科大学博士学位论文
关键词:胃癌;微阵列;转移:;发挥重要作用的基因。整合素介导的信号通路、跨膜受体信号丝,苏氨酸激酶信号传导通路等多个信号通路被异常激活。差异表达基因水平检测的结果均与微阵列芯片结果趋势一致。橹そ峁允荆钜毂泶锘蛟趍平和蛋白表达水平变化一致。肠型胃癌具有细胞过度增殖、炎症反应明显等特征:弥漫型胃癌具有细胞变形、活动力强,肿瘤基质重塑活跃特征;淋巴结转移阳性胃癌肿瘤细胞与基质问作用更为活跃。蛋白酶抑制因子、食管癌相关基因泶镌谟形蘖馨徒嶙R频闹琢鲎橹溆邢灾圆钜。肿瘤组织高表达的基因其蛋白表达主要定位于胃癌细胞的胞浆与胞膜上,其表达与淋巴结转移、制诔收喙亍A硪桓鲋琢鲎橹懈弑泶锏幕騎,其蛋自主要表达于肿瘤基质细胞中,而非在肿瘤细胞本身中,且在晡赴┫赴稻5捅达。单纯转染并稳定表达腗细胞株,在体外细胞迁移、侵袭力上与对照组没有显著性差异,但在人成纤维细胞诱导下,其体外迁移侵袭力明显增强。动物实验显示转染基因后赴淖R颇芰σ裁飨栽銮俊结论:应用微阵列技术是进行胃癌基因表达谱研究的一个高效、快速、可靠方法。胃癌组织的细胞增殖、移动、粘附能力及肿瘤基质重塑活跃;而免疫防御、外源性生物代谢、内环境稳定、凋亡等功能紊乱。胃癌的发生发展与多种细胞,核内外信指标。通过肿瘤细胞与肿瘤基质间的相互作用,胃癌组织中虺矢弑泶铮并对胃癌的侵袭转移起促进作用。表达在肠型、弥漫型和混合型胃癌三组间具显著性差异:基质金属蛋白酶号调控失控关系