文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
骨髓基质干细胞体外构建组织工程化软骨
姓名:刘天一
申请学位级别:博士
专业:外科学(整形外科)
指导教师:曹谊林
20050501
⑧———————————————————————————————一一阰狿上海第二医科大学博士学位论文狦甀呵猯.’疭第
得嘶日期:趔堑;￡作者签名:盔;学位论文作者签名;毒茫学位论文使用授权声明学位论文独创性声明日期:甚型:√二耸本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库迸行检索。有权将学位论文的标题文中作了明确说明并表示谢意。权保留学位论文势向国家主管部门或其指定机构送交论文趵电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查和摘要汇编出版,保密的学位论文在解密后适用本规定。期:蓝业仁导烦签名:
⑧骨髓基质干细胞体外构建组织工程化软骨中文摘要软骨缺损类疾患在修复重建外科中非常多见,目前常用的软骨或人工代用品移植修复等方法均存在许多问题,组织工程技术为软骨修复提供了一种全新的手段,但是软骨细胞来源不足严重限制了它的发展和临床应用,寻找新的种子细胞来源成为软骨组织工程进一步发展的关键。珺谴嬖谟诠撬杌手的一种成体干细胞,具有来源丰富、增殖力强、取材损伤轻微等优点,并且可以被定向诱导分化为软骨细胞,是软骨组织构建的优良种子细胞。大量研究已经证实,梢猿晒π薷垂亟谌砉侨彼穑湓谄は路侨砉俏⒒肪橙春苣研纬软骨组织,而整形外科中最为常见的往往是皮下部位的软骨缺损缍!⒈且等虼耍Sτ肂修复整形外科常见的皮下软骨缺损,很有必要开展体外软骨构建的研究。此外,体外软骨构建也有其自身的特点和重要意义:骨由单一种类细胞组成,非常适合体外构建;喽云は禄肪常逋饣肪掣合对干细胞进行定向诱导分化操作,条件容易控制;逋馀嘌菀卓刂乒建软骨的形态;逋夤菇ㄊ侨砉亲橹こ坦婺;τ煤筒祷⒄沟男枰!虽然很多国内外学者对逋馊砉枪菇ń辛舜罅康难芯坑胩剿鳎因缺乏特异性软骨诱导因子,对影响体外构建软骨质量的相关因素也缺乏深入研究,目前仍未建立成熟的诱导方案,构建技术很不稳定。而且由于对外构建软骨缺乏系统的体内评价,因此也无法确定体外构建软骨临床应用的可能性。此外,对体外特殊形态软骨组织潜场⒍!⒈且淼的构建缺乏研究,针对这些现状,本研究拟就以下几项逋馊砉枪菇ǖ墓丶际跽箍研究:逋夤菇ǖ目尚行匝芯浚航体外软骨构建技术平台,并对体外构建的软骨进行相关的体内、外评价。逋夤菇ㄖ饕2问挠呕禾剿间歇性离心力刺激、生长因子应用浓度和诱导时间等体外构建相关因素对软骨形骨髓基质干细胞而这是整形外科组织修复的必然要求。上海第二医科大学博士学位论文第
⑧细胞/的密度接种在圆盘状另一部分在体外继续诱导培养作为体外对照,芎笕〔募觳猓冉献橹结构和胞外基质特点。结果:体内植入组标本在皮下环境继续成熟,形状及后改用普通培养基培养,均于周时取材,比较体外诱导时间对软骨形成成的影响,优化体外构建参数,从而建立一套稳定有效的体外诱导构建方案。特定形态软骨构建:探索能否利用获得的技术方案体外构建片状及人鼻背等特殊【方法与结果】瓸体外软骨构建的可行性研究、暗厝姿捎盏糂体外构建组织工程软骨初步研究方法:将第二代猪联合诱导,,芎蠼腥砉翘匾性相关检测。结果:实验组细胞材料复合物形成了软骨样外观和组织结构,组织化学染色显示有大量蛋白聚糖沉积,在基因和蛋臼水平上检测到软骨特异性型胶原的表达,组织具备一定的力学强度。而对照组未形成软骨组织。体外构建的软骨体内植入及相关评价方法:体外诱导构建芎螅徊糠窒赴牧细春衔镏踩肼闶蟊巢科は拢体积无明显变化,陷窝结构排列致密有序,细胞外基质增多,生物力学特性明显改进,优于体外对照诱导培养组。瓸体外构建软骨条件优化浓度对逋馊砉切纬傻挠跋方法:应用痬痬疶、/浓度的与狪和地塞米松组成配伍分别进行体外诱导,芗觳猓冉喜煌琓—浓度对体外软骨形成的影响。结果:/浓度的即可达到稳定的诱导效果,细胞排列有序,胞外基质合成丰富,该应用浓度经济有效。诱导时间对逋馊砉切纬傻挠跋方法:体外诱导时间分别设定为堋周、堋周、周,诱导形态的软骨组织。支架上,应用/—/偷厝姿/上海第二医科大学博士学位论文第
异性相关检测。结果:间歇性力学刺激可以增加细胞外基质浚结果:体外构建的片状软骨组织结构均匀、质地致密,但是存在扭曲变形。逋夤菇ㄈ砉侵踩胩迥诤蠼徊匠墒欤毙巫春吞寤廾飨愿谋洹ü灾Ъ懿牧系脑に苄未恚梢栽谔逋夤菇ǔ鎏厥庑翁娜砉亲橹