文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
CAR在柯萨奇B3病毒感染心肌细胞中作用的实验研究
姓名:赵武
申请学位级别:硕士
专业:儿科学(心血管)
指导教师:周爱卿
炭氯鍮扯靖腥拘募∠赴凶饔玫牟煅檠芯谌烊骁癔鹰感染。轿璐滚炫衲ū谌堡塞孛文详缨黧要从免疫反成、细胞凋亡等方面探讨姆⒉』疲浞⒉』浦两心脏中泶锓岣唬讼酑表达水平逐渐降憔,至成年期则检测是辩疆床鬻冤静心斑管疾瘸之一,在急性期,其临床表现轻重不一,部分患者可发生心力震竭、心源性体克、室憾快速性心律失常。甚至猝死,努外一赎病毒德心肌炎擞终演变为扩张挂心鼹瘸,严重域骆骞体键痰。二中世纪七十年代班亲,⒉∪赵皆龆啵谕庑矶嘌д呃每氯鍮组病毒,建立了篹浆麓蘩模登蓑缨耱模型,浅寒完全鹇甓,黧藏探讨纳讶撤阒疲鉯骚床治疗掩供瑾论依蕹是翠在年等已菠现,爆管柯萨奇病毒不同的病谍秘,佩是都可以和细胞牍辨障赴受体结合。自此鞋瑟,霆纷谗多攀誊骜致力予该受蒋翦硪突,想是壹剥冬方峦氪未親赴呀庖褐蟹掷氤隽烁檬芴澹兔?氯娌毒帮膝纛簿受箨硐腹对等细胞的研究表明,虯喊邢赴慕岷霞捌渌意鹃病毒蠢在健匦脲匀顲鹩介导。7肿恿约跨朕糖蛋岛,广泛谨在于心脏、赡等照器中,由缨艇终结构壤、跨膜螺旋疏水性绪构域稀糯胞质结构域组成,在结构上属予免疫球蛋白超嫠嚣易濉熬表达水孚呈现魂态变化,在小艇轻骚簸器薪垒麓,不斑,等鸩《拘孕募⊙鬃畛<牟≡迨荂,菇次是、,等黥爵究表鹗扩张悭心瓿瘸布霰泶锶耗苁荂蔽赖性瘫毒感染心肌纳一个决定性斟荣,但是腥咎逋馀嘌男募∠赴允病毒瞧心瓤炎当前亟待解决的讽题。,汪坎《珹属于
心肌细胞毒性效应,以探讨固宥孕募∠赴谋;ぷ饔靡约癈诳氯鍮《靖腥拘募∠赴徒沟稳槎橹否也依赖谕庵两裆形醇ǖ馈1狙芯垦∮锰逋馀嘌律∈,和壬ǚ街址椒ɡ雌兰在腥拘募∠赴械淖饔谩的治疗策略,保护人类身体健康具有重要意义。第一部分:/槭笮募∠赴嘌材料和方法出生天的/∈螅∑湫氖壹∮反复冲洗危舫蒷笮。.サ囊鹊鞍酌执蜗赴培养箱中培养,每旎灰阂淮巍E嘌∈焙笮蠬旧ü鄄煨募∠赴翁В∈后以小鼠抗嵛萍〖《鞍椎タ寺】固寮ㄐ募∠赴宽比例约:ジ鲂募∠赴J疾ǘ募∠赴ǘ德屎徒诼的星形,呈同步化搏动,ǎ∈焙笮募∠赴恢赏形成细胞簇,呈放射状排列的同心圆状,成为所谓功能性合体细胞,搏动同步化,频率波动于显示,细胞体红色,呈星形,有伪足伸出,细胞核蓝色,呈圆形,位于细胞中央孕∈罂筧一横纹肌肌动蛋白单克隆抗体标记心肌细胞,胞浆内ず嵛萍〖《鞍卓乖恃粜苑从Α8菪募∠赴ǘ俜直群兔庖心肌细胞,,采用固逶は茸瓒闲募∠赴鸆,通过细胞病变效应据此,研究病毒性心肌炎的发病机制,这对于开拓病毒性心肌炎新瓾液所得细胞悬液以差速贴壁法纯化心肌细胞,%台盼蓝染色观察细胞成活率%煤的嘌鹘谙赴芏任×觯痬接种于孔培养板,軱,然后置结果培养小时后,心肌细胞已开始贴壁生长,为梭形,长杆状,长不同步,培养小时后,心肌细胞进一步伸展,伸出伪足,形成不规则ǎ账跤辛Γ诼晒嬖颉旧细胞化学鉴定结果显示心肌细胞纯度ァ
破碎,芸熳一X。/孔:⑨固椋尤隒前∈保靠准尤胪诳氯鍮《靖腥拘募∠赴斜さ稳橛と材料和方法心肌细胞培养如第一部分,所得心肌细胞悬液用含%孔,培养小时后的心肌细胞用于实验。实验分成二组:病毒感染组和结果在接种病毒后小时内,心肌细胞搏动频率明显加快,。左右,对照组心肌细胞搏动频率仍维持在病变效应第三部分:诳氯鍮《靖腥拘募∠赴凶饔玫氖笛檠芯的嘌鹘谙赴芏任个/,接种于孔培养板,/孔,培养小时后的心肌细胞用于实验,实验共分三组:①对照组:为抗小鼠タ寺】固用中继续培养,倒置显微镜下观察细胞病变。第二部分:腥拘募∠赴P偷慕的嘌鹘谙赴芏任×。弃去上清液后,在病毒感染组细胞中每孔加腅ひ海哉兆榻黾由ひ海嫖掠小时后,各组弃上清,加生长液/孑媾嘌鄄臁∈蹦樾募∠赴ǘ飨约趼⒓跞~还嬖颍赴,不明显,自小时开始,樾肌细胞搏动百分比明显下降,直至停止搏动,细胞变圆、变暗、成堆,观察固宥訡感染心肌细胞的保护作用并探讨其机制。一、细胞病变效应正常条件下培养的心肌细胞:组:每孔加入腗维持液,跤小时,矗覯培养液倍稀释孵育∈保矗覯培养液甀/孑T谝陨咸跫培养箱
关键词材料和方法心肌细胞培养如第一部分。培养小时后的心肌细胞用于实验,实验共分三组:同第三部分一,。≡波长测各孔吸光度值。结果樾募∠,。细胞的存活力。对腥拘募∠赴哂斜;ぷ饔茫浠圃谟贑抗体阻断了心肌细胞的崾綜感染心肌细胞可能是通过心肌细胞柯萨奇病毒和腺病毒受体柯萨奇病毒心肌细胞小鼠结果在接神病毒后小时内,樾募∠赴ǘ德拭飨约涌欤。笥遥哉兆楹虲抗体组仍维持在唬小时内樾募∠赴ǘ飨约趼⒓跞~规则,幻飨裕∈笨J迹珻组心