文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
CTGF在胰腺纤维化中的作用及TGFβ<,1>对其表达调控研究
姓名:孙蕴伟
申请学位级别:博士
专业:内科学(消化系病)
指导教师:袁耀宗
20040401
在胰腺纤维化中的作用及云浔泶锏骺匮芯分子学机制迄今尚未完全阐明。近年随着胰腺星状细胞的发现,为,的促成纤维细胞增殖和胶原沉着作用。因此,本课题试图较系统的探讨本研究首先以大鼠模型为研究对象,分别观察的表达情况和特征。我们对大鼠胰腺组织进行酶消化和不连续梯度离心获慢性胰腺炎主要表现为胰腺组织的进行性纤维化。导致该病变的细胞研究细胞因子网络在其中的作用机制提供了重要的平台。由于被激活以及随之生成的大量细胞外基质成分是胰腺纤维化病变产生的基础,在。鸬闹匾W饔靡鸦镜玫饺啡希而结缔组织生长因子是近年来认为与纤维化密切相关的另一。重要有丝分裂原,在多种病理模型中均可见其协同促进胰腺纤维化形成及件,推测当外源性体调控机制。的动态变化以及与纤维化程度之间的关系。在制备慢性胰腺炎大鼠模型后,取胰腺组织作染色、免疫组化肆鞍住型胶原、。结果发现制模芎笠裙芟著增生,胰管周围及小叶间和小叶内纤维化伴炎症细胞浸润,局部腺体萎缩代之以纤维瘢痕组织。免疫组化及原位杂交结果提示于腺上皮细胞胞浆和部分间质成纤维细胞并与纤连蛋白、徒涸的表达成正相关。上述结果示随着胰腺组织纤维化程度的加重、谋泶锵灾黾樱虼颂崾綜蚑赡茉谝认傧宋纬晒得原代,采用免疫细胞学检测细胞中交〖《鞍Ⅱ.、当该细胞活化并向成纤维样细胞分化过程中出现典型的甋、、中文摘要此过程中转化生长因子,.而起作用;但在,对其是否存在以及如何调控的机制,国内外至今尚未见有系统研究及报道。由于在启动子中有从υ,存在时能启动的表达,从而介导与胰腺纤维化之间的关系以及在水平上云浔泶锏木虲秸驮辉咏患觳V饕7植于间质区成纤维细胞胞浆、间质基质区和炎性细胞浸润区;而分布程中起重要作用。第二部分中,主要在体外分离并培养,同时观察中结蛋白、以及和蛋白的表达。并用半定量比较与、人肺成纤维细胞中的表达水平。
阳性表达;同时该细胞亦可分泌,且主要分布于胞浆内;,通表达,尤其是其中一揭颍佣俳笳咦魑S兴糠至言两种典型的成纤维细胞株相比,亦为基因高表达细胞。訮蠧虻牡骺刈饔谩N颐鞘紫裙菇含大鼠基因启动子的报告基因重组体猯,瞬时转化后,检测荧光素酶的活性以了解该基因启动子活性。结果发现过凝胶电泳阻滞试验观察该片段与核蛋白的结合能力。实验结果证实訡虻募せ罘⑸。我们通过应用实时定量际醪和免疫沉淀的方法,观察盏继逋馀嘌腜培养条件下轙碳有基础量的表达,提示该机制可能对维持的基础生理功能和维持细胞的形态结构有一定作用。当存在】刺激时,与,上调中基因启动子活性的表达类似,短时问内即可使中在转录水平呈现增加趋势,在∈左右达到高峰并可持续至小时左右。蛋白质水平的变化也反应哂写俳鳳蠧暮铣捎敕置诠δ堋总之,本研究结果提示能协同涸谝认傧宋纬晒中起重要作用;胰腺组织中是合成与分泌的主要细胞来源;体外培养的可有基础量的表达,贗能促使其表达量在短时间内显著增加;其机制可能是ü系鱌蠧舳导、汀型胶原等形成,导致胰腺组织纤维化的逐渐形成。因此,深入研究两因子间的调控和信号转导途径以尽可能有效阻断捌下游因子的表达,应有利于减轻胰腺纤维化的形成并为治疗提供新的研究思路。关键词:胰腺纤维化:胰腺星状细胞:为深入了解盏己铣蒀幕疲颐窃诘谌糠挚J即分子水平探讨短时间内即可上调猯活性并呈剂量依赖性;为进~步了解结合中和蛋白合成、分泌的时效关系。结果表明,在常规结缔组织生长因子;转化生长因子的了海第二医科大学博学位论文
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第一部分促纤维化细胞因子在纤维化胰腺组织中的表达材料和方法引言径参与胰腺纤维化的启动与发展。转化生长因子,慢性胰腺炎的病因及发病机制至今尚未完全阐明。但不同因素导致的胰腺病理学改变均类似,表现为胰腺组织内炎细胞浸润、实质细胞结构破介入并发挥各自的作用始终是慢性胰腺炎发病机制研究的热点,其中包括多肽生长因子和肽类调节因子、趋化因子等。它们通过自分泌、旁分泌途为明确的促纤维化生成因子,它来源于血小板、炎症细胞、胰腺泡细胞、导管上皮细胞及胰腺星状细胞。其结构为耐热、耐酸的同型二聚体多肽,可通过多种途径诱导胰腺纤维化形成“’。近来,结缔组织生长因子逐渐引起关注。是各