文档介绍：二:一雠:瞒』鬻‘’�翮弛瞒仂��瓿г�日研究生签名:孝良剀河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了文中特别加以标注等内容外,文中不包含其他人已发表或撰写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写,文责自负。
录目研究论文泛素特异性蛋白酶���姆肿涌寺�前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..�材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.�综述泛素特异性蛋白酶���幕钚约觳狻�����������致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯�个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯�中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.�英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.�结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯��蒥木⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯��附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.�讨�睢������������������������������������结�亍������������������������������������参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..�日�唷��������������������������������������
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泛素特异性蛋白酶���姆肿涌寺�要目的:泛素介导的蛋白质降解可调控细胞内大量生命活动,包括细胞周期、��薷础⒆B嫉骺亍⒚庖哂Υ鸷托藕糯ǖ肌7核赜氲鞍字实牧�接是由泛素活化酶�、泛素结合酶��依次催化完成的。去泛素化酶���ü�コ�鞍字噬狭�拥姆核兀�佣�缘鞍字�的泛素化进行负向调节。人类基因组编码大约�种���雌湫蛄邢嗨������琔��、泛素羧基末端水解酶����������,���⒙殉仓琢鱿喙氐鞍酌����⒑���荄�中种类最多、成员结构最为多样的一个家族。尽管不同的��ざ滩坏取⒔峁垢饕欤���堑陌被�嵝蛄兄卸己�懈叨缺J氐陌腚�氨酸���⒆榘彼���和天冬氨酸���峁褂颉D壳把芯糠⑾郑�胞生长、抑制凋亡、调控发育进程和抑制基因沉默等。本研究从大鼠脑组织和人类���辛鱿赴�曛蟹掷肓艘桓鲂碌姆核�特异性蛋白酶基因���M�狈治隽舜笫髐��基因在各组织中的分布情况,并对其去泛素化酶活性进行了研究。大鼠和人类����哂腥シ核�化酶活性,但人类���腟�,第��蛔榘彼嵬槐湮L於�彼岷蟛荒�剪切底物,表明该��赡芫哂兄匾W饔谩�方法:��笫髐��的克隆。利用���从大鼠脑组织中提取,营��,反转录合成第一链��,并利用���奶匾煲�锝�蠵�扩增。��先从大鼠大脑、心、肾、肝、肺、骨骼肌、脾和睾丸等组织中提取总���中文摘要摘性和作用机制可分为五个家族,分别是:泛素特异性蛋白酶����甁���峁褂虻腗�和含金属蛋白酶结构域的��蛋白酶。��骺卮罅刻迥谏�锖筒±斫�蹋��ㄎ榷ㄖ琢鲆种埔蜃觩�、调控细产物克隆至��.���载体并转化大肠杆菌��感受态细胞。经�蘁���盖屑觳夂螅��て诖笮√醮�闹柿=�徊讲庑蚣�ā���笫髐��的组织分布通过实时荧光定量��际踅�蟹治觥J�以大鼠���隚��特异引物和一步法��.����约梁薪�蠵�扩�����.�����畉������
增。结果的计算基于荧光信号到达阈值所需循环数���,最后求得�浴鱟‘即为各组织���南喽员泶锼�健���笫骍��融合蛋白的表达。经���脱玓�盖泻螅�ù笫����迦隚�表达质粒��.�.�⒆;疍��惺芴�赴�>璉��盏��∈焙螅�妇�芰呀庖杭捌渖锨搴统恋斫�����.��分析。������蚿��猺������雙�—�—��猵—��沧;�蟪Ω司��惺芴�赴�>璉��盏己螅�%��甈��⒗�眯∈罂筽.��固�进行蛋白质的印迹分析。��死鄒��的克隆。利用���从人类��细胞中提取总���并利用���匾煲�锝�蠵�反应。将���迦雙�����,并利用����酆厦付园被�岬��位组氨酸进行点突变。以�.��畃.���腥�结果:��笫骍��基因编码区含��个碱基,编码��霭被�幔�撇�其分子量为���K��蟹核靥匾煨缘鞍酌父叨缺J氐陌腚装彼帷⒆�����在大鼠各组织中均有表达,在脾和肺中表达较多,在睾丸、肾、大脑和肝中表达量居中,在心和骨骼肌中表达较少��璉��盏己蚐�.��检测可发现在大肠杆菌���中表达出�����诤系鞍祝�浞肿恿看笤嘉����シ核鼗�富钚苑治霰砻鞔笫骍��可将底物�.��畃。��系���死郩��基因编码区含��个碱基,编码��霭被�幔�撇���R吧