文档介绍：用PCR扩增16SrRNA基因鉴定幽门螺杆菌的细
【摘要】目的: 探讨幽门螺杆菌及其稳定L型的检测与鉴定方法。方法: 用抗生素诱导、滤菌器过滤、非高渗透压培养基培养获得幽门螺杆菌稳定L型纯培养物,对幽门螺杆菌及其稳定L型进行16SrRNA基因的PCR扩增及序列测定。结果: 幽门螺杆菌及其稳定L型的16SrRNA基因PCR扩增产物经1%琼脂糖电泳,在紫外检测仪下可见550 bp的DNA条带,测序结果经NCBI Blast分析比对,基因同源性可达100%。结论: 16SrRNA基因PCR检测可用于幽门螺杆菌L型及其他形态变异的菌种鉴定。
【关键词】螺杆菌,幽门; 细胞壁; 稳定L型; 16SrRNA基因; 聚合酶链反应
[Abstract]Objective: To exploit effective methods for detection and identification of Helicobacter pylori and its stable cell (Lform). Methods: Stable Lform of H. pylori in nonhyperosmosic medium and purified by filtration. The 16SrRNA gene of Lform and normal H. pylori plified by PCR and analyzed ately 550 bp. and their sequences ology H. pylori could be identified through analyzing its 16SrDNA ; 16SrRNA; polymerase chain reaction

幽门螺杆菌(HP)是定植于人胃部的一种革兰阴性细菌,与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等疾病的发生密切相关[1]。HP容易发生圆球形变异,多数学者认为HP球形转化与HP感染的迁延不愈、反复发作及流行传播密切相关[2],细胞壁缺陷型HP属于圆球形变异中的一类。由于细胞壁缺陷导致细菌的原有形态、代谢活性、表面抗原、致病性等发生改变,以致采用常规细菌学方法难以分离和鉴定,从而导致病原学诊断的漏诊、误诊甚至延误治疗[3]。目前国内外文献均未见到关于HP稳定L型的鉴定方法,2007-2008年采用抗生素诱导、非高渗透压培养基培养法获得HP稳定L型,对其进行16SrRNA基因PCR检测与测序分析。
1 材料与方法
材料
菌株:HP菌株SS1、NCTC11637、NCTC11639,获赠于中国疾病预防控制中心传染病预防控制所。诱导剂:注射用头孢曲松钠(Ceftriaxone sodium),上海罗氏制药有限公司生产,批号SH0693。培养基:7%绵羊血哥伦比亚琼脂平板、PG液、布氏肉汤培养基按文献[3]及说明书方法制备。引物:参照文献[4]合成幽门螺杆菌种特异性16SrRNA基因的引物,上游引物为5′
CTTGCTAGAGTGCTGATTA 3′,下游引物5′ACACTCTAGAATAGT 3′,由北京天根生物工程有限公司合成,按说明书推荐方法使用。PCR扩增试剂盒和细菌基因组DNA抽提试剂盒,购自北京天根生物工程有限公司。
HP的培养
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