文档介绍：人白介素-12转基因马铃薯体系外源基因表达
摘要:探讨人白介素-12转基因马铃薯体系外源基因表达的遗传稳定性。方法:将重组质粒用农杆菌介导法转染马铃薯茎段,筛选转基因植株,通过elisa检测hil-12在转基因马铃薯中的表达情况。结果经elisa检测茎和叶中hil-12的表达量,其中2株与对照组相比有显著性差异(p<),转基因马铃薯含有hil-±±。结论:人白介素-12转基因马铃薯体系外源基因表达的遗传稳定性强
关键词:人白细胞介素12;遗传稳定性;马铃薯
中图分类号:
人白细胞介素-12(human interleukin 12, hil-12)是由单核细胞、巨噬细胞分泌表达的一种细胞因子,具有广泛的生物学活性,它能促进nk细胞和t细胞的增殖、活化及细胞毒作用,促进巨噬细胞的活化,并诱导多种细胞因子的产生,调节th0细胞向th1细胞分化增殖,增强细胞免疫功能[1-2]。本文利用基因重组技术,构建人白介素-12基因的植物表达载体,将hil-12基因导入马铃薯,获取转基因马铃薯植株,探索人白介素-12转基因马铃薯体系外源基因表达的遗传稳定性,现报告如下。
1 材料与方法
主要材料
质粒pca13-hil-12由中科院遗传发育研究所提供;pbi121由浙江大学提供;根癌农杆菌eha105以及辅助质粒prk2013由中国科学院植物研究所提供;菌株dh5
α购于上海生工生物工程公司。hil-12基因引物按基因库中cdna序列设计,两端分别加上smaⅰ和sacⅰ酶切位点,由上海生物工程公司合成。引物序列见下:①上游引物 5’-c a tgg gtc acc agc a-3’,下游引物 5’-g gag ctc tta gga agc att cag ata g-3’。细胞株cos-7购自中科院遗传发育研究所,马铃薯试管苗(中薯1号),由本实验室传代培养。
马铃薯体系外源基因表达体系的建立
马铃薯试管苗的培育
选择粗壮的试管苗,无菌下切成带一叶一节的接种于ms生长培养基上,温度25℃,光照14h/d,光强2000lx培养。
转化
平板上分别挑出三亲杂交转化后的根癌农杆菌eha105单个菌落,接种在三抗lb液体培养基中28℃,过夜培养,4℃ 5000rpm离心10min,菌体重悬于ms0中,;无菌状态下,将培育好的马铃薯试管苗,剪下茎段在上述菌液中浸泡5min,用无菌滤纸吸干表面菌液,转入表面铺有一层滤纸的愈伤组织诱导培养基上,于28℃暗培养3d后,转到抗性愈伤组织诱导培养基上,25℃光照16h/d,光强2000lx培养,诱导抗性愈伤组织,10-15d后,伤口部位出现微小的愈伤组织,将愈伤组织连同外植体一起转移到芽分化培养基上,20-25d后分化出小芽,每两周更换一次培养基。
转化体的筛选
待芽分化培养基上的芽长至2-3cm高时,切下转至无激素的生根培养基上继代培养,进行生根筛选,将在抗性培养基上生根的马铃薯植株切成带有2-3个节的茎段,接种在ms高糖培养基上,暗处诱导试管苗结薯。观察组:马铃薯试管苗,剪下茎段在三亲杂交转化后的根癌农杆菌eha105菌液中浸泡5mi