文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
分子—细胞遗传学技术的发展和在白血病研究中的应用
姓名:赵萌
申请学位级别:硕士
专业:内科学(血液病)
指导教师:陈赛娟

分子一细胞遗传学技术的发展和在白血病研究中的应用中文摘要飞识别特殊类型肿瘤细施特异翡染色体异常,分离所累及妁基因,阑明它们致病的分子机制和与临床的关系是研究肿瘤发生、发展的核心任务。%的自血癔衣特异的染色体易位,提供了肿瘤研究的极好模型。分子细施遗传学是近年来为探索疾病发生的分子机制,在传统细胞遗传学显带技术的基础上鳍龠分子生物学技术褥发展起寒的一,约坝善溲苌娜旧逋可缃献氚咦樵咏,洚蚏等方法。及其捆关技术作为连接细胞遗传学和分子生物学的旃梁,在溺磷包括白盎病柱肉的多种肿瘸发生、发展的规制以及诊断分塑、治疗监测、预后估计和微小残留病检测等诸方面都燕成力不可缺少的重要手段,。/门耨兴科学。它主要包括荧光原位杂交本文第一部分讨论了荧光愿位杂交技术在检测自血瘸隐匿型、多重稍—上海第医科丈学硕士论文/
未检测到的染色体易位,是一理想的筛选舅、藻。而一与常规核型分性疾病的染色体易位和基因改变,提供了很好的方法\分耐细胞遗传学技术基因的探针和染色体涂抹探针检测了9嫦赴传学未检出的隐匿型易位。结果表明,当特异染色体易位作为复杂核型的一部分被其它的异常所掩盖时,仅凭常规细胞遗传学很难判断。是一更有效的检测手段,对阐明隐匿型易位真正的发生率,诊断分型、指导治疗和预后判断具有重要的参考价值。本文第二部分用染色体特异的着丝粒探针进行荧光原位杂交分析一组恶性血液病,不仅能证实经典的双着丝粒染色体,丝粒,是检测克隆性双着丝粒染色体异常发生率的可靠手段钎通过运用不同成分的探针组合,还可以发现着丝粒及着丝粒周染色体重排中累及的断裂点,为进一步研究重排机制及其分子生物学效应奠定基本文第三部分讨论了多重荧光原位杂交技术体系的建立,并利用该技术分析了两例白血病复杂核型异常。实验结果表明染色体异常易位中的应用。以;易位累及的,更能分辨重排染色体上相距很近用常规显带技术无法鉴别的两个着础。对于未知的白血病染色体数量或结构异常,尤其对一些常规核型分析析互相补充联合应用,为阐明所有白血病乃至其他肿瘤性疾病和遗传关键词白血病\上海第二医科大学硕士论文
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第一部分荧光原位杂交技术检测隐匿型易位前言;是儿童和青年凶畛<奶匾煨匀旧逡典型的细胞形态学、细胞遗传学和分子生物学特征,临床完全缓解率关于遣血和淋巴组织恶性肿瘤分类标准更是将具有的独列为一类”R虼耍返丶觳鈚;籷孜欢訟的诊断分型,制定危险程度相关的治疗方案和判断预后都相当重要。的检出率分别为%和%“5或复发时出现附加染色体的增加、丢失、重复和倒位以及复杂变异型可能作为复杂易位的一部分被其它的异常所掩盖,仅凭常规细胞遗传切相关“薄4罅垦芯勘砻鳎哂衪;腁是一特殊类型,具有高,预后相对较好”闒协作组提出了急性白血病的中停聪赴翁А⒚庖哐А⑾赴糯Х中停魅妨讼赴传学在白血病诊断和分型中的重要参考意义”晔澜缥郎橹常规细胞遗传学核型分析虯—中;サ膖;籷±诔醴易位,受累染色体有趸条以上”U馐保瑃;籷学很难判断,须用其它分子一细胞生物学技术证实,称为隐匿型位,与中椭械腁—毙圆糠址只驮剂O赴籽2密上海第二医科大学硕士论文
情变化和克隆演化。检测彳彪』脚融合基因的转录本和蛑”牡和第磐庀宰又浞⑸狭眩琺钇,的艘孜恢号染了的岷辖峁褂过显性负的方式抑制野生型的活性,在疾病发生中起重要作用。方法“”。抽提包含第鐾庀宰拥恼沉?寺和覆色信号虳躺藕标记作为探针,与;阳性病人的中期分裂相杂交结果显示:一条正常湃旧宓暮焐藕抛R频窖苌旧迳希鶤疎融湃旧迳系暮焐藕偶负跞ú恳孜坏窖苌号染湃旧迳系穆躺藕盘。究床怀觥湃旧迳衔蘅杉藕拧U1瓯径哉帐笛榈暮臁⒙躺合信号的假阳性率较低,只有ィ繁U馓滋秸胂低惩耆芄凰娣貌;使号染色体长臂带的基因“又名琧色体上,与湃旧宄け区霞负跽鯡虴的大部分序列,通等报道了一种检测;一诤匣虻乃盖整个基因编码序列的克隆腄,分别以派嫌幸欢院焐藕牛惶跽号染色体上有一对绿色信号。一条衍生湃旧迳嫌幸欢院焐ê吐躺诤隙傻幕粕藕牛硎疽条色体上,而乓孜坏基因“”置鸆该融合基因保留合信号。因为故衍生易位。融合。琈上海第二医科大学硕士论文
材料和方法排还可用逆转录一聚合酶连反应狿蚐咏弧啊啊—虵寄苡糜诔9嫦赴糯醇斐龅囊孜弧啊薄以及不同组合的染色体全长探针经双色.⑷旧逋磕患者复杂的分子一细胞遗传学改变以及融合基因状型染色体易位的准确性和高效性。.H旧灞瓯荆喝∽哉H送庵苎!.∪斯撬璞瓯纠丛从谏虾H鸾鹨皆骸⑿禄R皆骸⑺