文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
人牙胚釉原蛋白成熟肽基因的克隆
姓名:程岚
申请学位级别:硕士
专业:口腔临床医学(口腔内科)
指导教师:束蓉
缩略语表大肠杆菌焦碳酸二乙酯镍一次氮基三乙酸简称中文全称釉基质蛋白赫特维氏上皮根鞘涣姿岣视腿┩——,
中文详细摘要人牙胚釉原蛋白成熟肽基因的克隆Mü品平皿可见散在单菌落。样品质粒在退盖泻蟮牡缬揪允荆涸胚胎牙胚组织中的釉原蛋白成熟肽基因,构建含有人釉原蛋白成熟肽基因觘欣┰龀鋈擞栽鞍谆颍⒁一磷酸甘油醛脱氢酶基因原蛋白基因作为模板,┰龌竦昧蕉舜邢拗菩阅谇忻肝坏愕娜擞栽公布的釉原蛋白的标准序列完全一致,即为釉原蛋白成熟肽的大肠杆菌转化成功,空白对照布满单菌落;阴性对照无菌落生长;样目的:牙周病治疗的理想效果应该是一种功能性的修复,即牙周支持组织的真正再生。很多研究表明在牙周手术中应用釉基质蛋白可使牙周组织形成新的含有胶原纤维的无细胞性牙骨质和新的牙槽骨。釉原蛋白作为发育中釉基质蛋白的主要组分,也是釉基质蛋白中诱导牙周再生的主要活异源性和蛋白质功能不稳定等不足之处。如果能采用对牙周组织再生具有原性,而且能提高蛋白质的生物活性。因此,本研究拟通过选择性克隆人的重组表达质粒,为今后融合表达获得基因工程化的人釉原蛋白奠定基方法:选择个月胎龄的人胚胎,无菌条件下取出发育中的牙胚组织,抽提总設为引物逆转录合成牙胚,采用作为对照检验总樘峒癛的效率。在此基础上以得到的人釉蛋白成熟肽的编码序列。将目标片段和表达载体质粒肂盖泻蠼辛樱昧右鹤;蟪Ω司鶧结果:对目的基因的测序报告显示逆转录┰龀龅幕蚱斡性成分。目前研究中广泛使用的仍然是提取自猪牙胚的釉基质蛋白,具有显著作用的单一组份的人釉原蛋白,不仅能解决临床应用中蛋白质的免疫⒚盖泻筒庑蚣ǎ秆⊙粜钥寺础。编码序列。汉5诙娇拼笱叮簍学位论文
浇峡瞻锥哉盏闹柿<爸柿多一条特异条带。样品质粒的完全褶丽,并且攒入片段两端的限制性内切酶位点全部准确无误。结论:从人胚胎的牙胚组织中成功获取釉源蛋白成熟肽的编码序列;成功校建含有人獭原蛋白成熟敝基因的重缀密达质粒。关键词:釉原蛋白、⒛孀B级嗑勖噶词椒从Α㈦菩测序报告证实旗敝泻橙氲幕蚱斡胗栽耙统墒祀幕硇蛄内切酶、质粒上海第二医辩大学硕士学位论文
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人牙胚釉原蛋白成熟肽基因的克隆,唤瞿苡行Т俳为牙骨质形成的先导,在牙骨质形成前沉积于中间牙骨质内。并且通过阻牙周支持组织的破环不仅在功能上而且在美观上对患者都造成极大的损即达到理想的愈合方式——牙周组织再生。真正的牙周组织再生是指无细仍不明了。而当发育完成以后,由于组织细胞来源较少,又缺乏刺激分来人们发现一些多肽生长因子对牙周组织的再生能力有不同程度的促进作自年虰状翁岢觯醋院仗赝仙掀じ益得到牙周病学者的重视。研究发现在牙根发育过程中,釉基质蛋白作碍细胞性牙骨质的形成,达到促进与牙本质结合更为牢固的无细胞性牙骨牙周病是发生于牙周支持组织的疾病,是口腔两大类主要疾病之一。害。牙周组织由牙龈、牙周膜、牙骨质、牙槽骨组成,四种组织的有机结合形成了牙齿硬组织和口腔软组织的良好封闭状态。由于每种组织都有各自的组织学和生物学特性,同时存在多种组织破坏的牙周病在临床治疗上很难达到理想的效果。牙周病治疗的最终目的不仅在于消除致病因素,终止疾病的发展,更在于使被病变破坏的牙周组织恢复原有的结构和功能,胞性牙骨质和细胞性牙骨质沉积在原有的牙骨质或牙本质表面,新生的牙周韧带形成功能性排列,埋入新生的牙骨质,并与新形成的牙槽骨相连接P矶嘌芯勘砻餮乐芨阶诺闹亟ㄊ峭耆ǹ赡艿模渲械墓丶湍训阍谟牙骨质和牙周韧带的再生。在牙齿发育过程中,牙骨质和牙周韧带的分化形成是在多种组织的相互作用下完成的,其中的许多信号和影响因素至今化、促进再生的信号,使得牙骨质和牙周韧带的再生能力极为有限。近年周韧带、牙骨质、牙槽骨再生,而且这些新生的组织能形成类似正常的牙,挠灾氏喙氐鞍卓梢杂盏佳栏部无细胞性牙骨质形成以来,釉基质蛋白在诱导牙周组织再生方面的作用用,其中釉基质蛋白周组织的排列,从而有可能达到真正意义上的牙周再生。前言’上海第二医科大学颂:匕学位论文
分,分子量范围缓彼帷⒆榘彼岷凸劝滨0贰U庑┑鞍质都是成釉细胞中同一基因——釉原蛋白基因的表达产物,小分子量的釉过对人和一些动物釉原蛋白一级结构的研究发现,该蛋白在种属间有明显体上釉原蛋白的全部序列的相似性达%,两条染色体编码蛋白和庀宰保守性较低。逆转录际踔な抵饕5淖B急纠醋