山东大学生化实验报告-蛋白质浓度测定.doc

文档介绍：蛋白质浓度的测定(Folin-酚试剂法)
【实验目的】
熟悉并掌握用Folin-酚法测定蛋白质浓度的方法。
【实验原理】
蛋白质(或多肽)分子中含有酪氨酸或色氨酸,能与Folin-酚试剂起氧化还原反应,生成蓝色化合物,蓝色的深浅与蛋白质浓度成正比,可通过绘制标准曲线,用比色法测定蛋白质浓度。
【实验试剂】

-酚乙液(原液与水按1:1比例混合,实验室已准备)
-酚甲液(实验室已准备) A液 4%Na2CO3: %NaOH=1:1
B液 1%CuSO4 : 2%酒石酸钾钠=1:1
A:B= 50:1 混匀
(稀释200倍)
【实验步骤】
准备9支干净的试管,按表一顺序加入试剂
表一
序
号
试
剂
1
2
3
4
5
6
7
8
9
标准蛋白/ml
0




1
0
0
0
血清(稀释
0
0
0
0
0
0



200倍)/ml
水/ml
1




0



各试管中加入5ml Folin-酚甲液,用旋涡摇匀器充分混合均匀,静置水浴(37度)10min。
Folin-酚乙液,用旋涡摇匀气充分混合均匀,静置水浴(37度)30min。
使用分光光度计,用640nm波长进行比色。
【实验结果】
表二各试管中标准蛋白浓度和OD值
序号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
标准蛋白
浓度ug/ml
0
40
80
120
160
200
/
/
/
ODλ=640nm
0








A、B、C三支试管中液体在640nm处OD值的平均值为
ODλ=640nm=(++)/3=
如图一蛋白质浓度的标准曲线,当OD=,标准蛋白质