文档介绍：实验六
大肠杆菌菌浓的测定
及发酵罐实验的了解
目的要求
学****比浊法测量细菌数量的方法;
学****空气浴摇床的使用方法;
学****分光光度计和离心机的使用方法;
掌握菌浓和菌体干重关系曲线的测定方法;
了解通用发酵罐的基本结构。
了解发酵罐实验的一般流程及注意事项。
微生物生长曲线的测定
比浊法
干重法
菌落计数法
血球计数板计数法
…
菌浓OD600与菌干重的对应关系
将大肠杆菌用LB培养基进行培养,在快速生长中期取样,分别用去离子水(新鲜LB培养基)稀释至不同浓度,分别测定OD600值。同时取10mL菌液,8000rpm离心5min后,弃菌液,并用无菌水重悬洗涤、离心2次, 80℃下烘干至恒重后,测得干重。
菌浓与OD600的对应关系如下图所示。
经数据拟合,线性良好。
大肠杆菌菌浓OD600与菌干重的关系曲线
编号
样品浓度(g/L)
OD600
离心管空重(g)
离心管+菌重量(g)
实验材料
菌种:
大肠杆菌。(老师提前准备菌种和用于菌体干重测定的菌液)
仪器和其它物品:
722型分光光度计,空气浴振荡摇床,离心机,比色皿,试管,移液器、枪头、离心管等。
上次灭菌的肉膏蛋白胨液体培养基。
发酵罐
发酵培养基
发酵菌种
火圈…
实验内容分配
每4人一组
每组建立一个菌浓和OD600关系曲线。
分光光度计的实验
空白对照
吸光度和透光度
吸光度值的适用范围
离心机的使用
离心管平衡!
离心效果与转速、时间的关系
【实验内容】
1. 离心管称重
将一干净15ml 离心管,用分析天平准确称重并记录。
2. 菌液离心
将老师准备好的大肠杆菌摇瓶,准确吸取菌液10ml加至已称重的离心管内(取液前将培养液振荡,使细胞均匀分布) 。与另一加水的相同离心管进行配平。8000rpm离心5min,弃去上清,加去10ml离子水重悬菌体,离心。再重复上述洗涤操作1次。弃去水溶液,将带有菌体的离心管在80℃烘干至恒重。准确称重并记录。
【实验内容】
3. 菌液稀释
将老师准备好的大肠杆菌摇瓶,吸取一定体积的菌液至试管中,在不同试管中按不同比例进行稀释。(至少5个水平)
4. 测定吸光度
用未接种的肉膏蛋白胨液体培养基作空白对照,选用600nm波长进行光电比浊测定。~(测定OD值前,将待测定的样品液振荡,使细胞均匀分布)。
做一个以去离子水稀释的对比试验(以去离子水做空白对照),看肉膏蛋白胨培养基对OD600吸光度的影响。