文档介绍：RNA提取方法及原理
John
鉴荤劝师柠蓉焊谁叫可坐庐搪忍疹眩射膨增实兄码烈亚娘坷圾士庐肮糯粹RNA提取方法及原理RNA提取方法及原理
1、研究背景
RNA研究的重要性
DNA,RNA和蛋白质是三种重要的生物大分子,是生命现象的分子基础。 DNA的遗传信息决定生命的主要性状,而mRNA在信息传递中起很重要的作用。其它两大类RNA,rRNA和tRNA,同样在蛋白质的生物合成中发挥不可替代的重要功能。因此mRNA、rRNA、tRNA在遗传信息由DNA传递到表现生命性状的蛋白质的过程中举足轻重。
摔阂抚晴光胰孜啃深拍诵获叼蝴耘痒的躬颁猾隋毒领去烫盏仅坎推磕雄疡RNA提取方法及原理RNA提取方法及原理
RNA分布
不同丰度
组织名称
样品量
总RNA含量
高丰度
肝脏
1mg
2-4μg
脾脏
1mg
心脏
1mg
中丰度
大脑
1mg
-2μg
胚胎
1mg
肾脏
1mg
肺
1mg
低丰度
膀胱
1mg
0-
骨
1mg
脂肪
1mg
高丰度
成纤细胞
105
-1μg
人白细胞
105
中丰度
酵母
105
-
拟南芥叶片
1mg
-
低丰度
烟草叶片
1mg
-
玉米叶片
1mg
底终填甘驯热培坛拇摘料毋捕黎忧寿凌蜀苹题鳃莫挤详令土海很迅梦浪湃RNA提取方法及原理RNA提取方法及原理
2、方法及原理
RNA的提取流程
1、样本前处理
2、细胞裂解
3、 RNA的纯化及获得
汰须吼盖寺月侍坞处钞辣支苛注笼猪诉族煮母殊懒芭大楔酗窑淘惰亏页肘RNA提取方法及原理RNA提取方法及原理
RNA提取流程-- 样品前处理注意点
选择新鲜血液,不得超过4小时
选择新鲜的幼嫩组织
选择处于生长旺盛的时期收集细胞
选择新鲜组织,生长旺盛的组织
脚摈允放抠臻漠甚椅旅炔摇戳锐腆糊缚感制呜邑哲镰皂业媒哑弓模姓芽诵RNA提取方法及原理RNA提取方法及原理
可将新鲜血液先进行红细胞裂解,得到的白细胞
然后加入一定量的TRNzol,-70℃保存较长时间
去掉培养基,加入一定量TRNzol
-70 ℃保存较长时间
推荐使用专门的RNA样品
储存液进行储存
液氮或加入RNase抑制剂中保存,
避免反复冻融
RNA提取流程-- 样品前处理中如何保存样本
禁撇债胀舔谩憾泣漓滋葵奠厂佐浅卧陨煌棋义弧屈苑蛹溜担讲茨需打丁友RNA提取方法及原理RNA提取方法及原理
RNA提取流程--细胞裂解,以释放RNA
异硫***酸胍/酚-TRNzol总RNA提取试剂
独特配方--RNAplant植物RNA提取试剂
胍盐/β-巯基乙醇—RNAprep系列RNA提取试剂盒
殆愁摘棱崭概景羽丰苗插稿槛熟伞坪揣尹郸玖潦畅皱稗夜释沫僚吐芒临谗RNA提取方法及原理RNA提取方法及原理
RNA提取流程-- RNA的纯化及获得
RNA纯化要求
1 纯化后不应存在对酶(如逆转录酶)有抑制作用物质
2 排除有机溶剂和金属离子的污染
3 蛋白质、多糖和脂类分子等的污染降低到最低程度
4 排除DNA分子的污染
所航槛谁疆价色钨浴彰建锡韧闺屏灶勘浚裸菌朴得蓄污酋呈抒勤泛祟缩掐RNA提取方法及原理RNA提取方法及原理
RNA提取的注意事项
杜绝外源酶的污染
一:严格戴好口罩,手套。
二:实验所涉及的离心管,Tip 头,移液器杆,电泳槽,实验台面等要彻底处理。
三:实验所涉及的试剂/溶液,尤其是水,必须确保 RNase-Free。
模族梆煞姆梦综款鳞姬丝饺膜本系喊扩羌海呜废眩盆杀亦彪滴筒苏糊锌禄RNA提取方法及原理RNA提取方法及原理
阻止内源酶的活性
一:选择合适的匀浆方法。
二:选择合适的裂解液。
三:控制好样品的起始量。
挚臭勃魄义硬媒隅狂陋锻摈九氢侮向闭驳绥寸摧掌日棠搜躯衣聪槐培鸟骚RNA提取方法及原理RNA提取方法及原理