文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
脱细胞组织基质应用于血管组织工程的初步研究
姓名:任宏
申请学位级别:硕士
专业:儿科学(心胸外科)
指导教师:黄惠民
脱细胞组织基质在血管组织工程中应用的初步研究晗刚R为血管移植物的研究开辟了一个新的领域。溴中,细胞外基质替代物的研究修复效果,具有广泛的开发和应用价值颐墙票竿严赴橹剩⒂椒ǎ9芷交∠赴幕袢⑴嘌⒗┰龊图ǎ喝⌒律」。一种生物衍生材料——脱细胞目的:,而组织工程组织基质,成为生物材料方面研究的热点,在皮肤、膀胱、心瓣膜等组织工程中已开展对该种材料的研究和应用,发现了其对组织、器官有令人满意的用于血管组织工程,探讨其是否易于血管细胞的附着和生长,是否符合血管的生理要求,为制备组织工程化血管打下良好的基础,并期寄组织工程化血养。用ヒ鹊鞍酌赶赴谔逋庖:谋壤ù嘌锏揭定的细胞数。采用间接荧光免痰组化的方法,以交〖《鞍椎タ寺】体作为一抗,鉴定血管平滑肌细胞。制备血管脱细胞组织基质:取成年母羊的胸主动脉,先经%胰蛋白酶消化小时,再用处理小时,最后经反复冻溶后一冷冻一千燥,制得血管脱细胞组织基质。经生物力学测定仪检测脱细胞基质的机械强度。。采用团体煅榻行数据统计。平滑肌细胞的种植:采用针筒注射的方法,将体外培养的牛血管平滑肌细胞种植于制各的羊血管脱细胞组织基质上,共同孵育埽做病理石蜡切片、。结果:原代培养的细胞,炜杉赴计康酌婊プ笥遥赴呈梭形、星形、三角形,胞浆透亮,胞核呈卵圆形或圆柱形,可见核分裂;是非常重要的内容,是要选择和制备一种适当的生物材料,,不引起机体的免疫排斥反应,易管最终能应用于临床并达到长期良好的治疗效果。颈外动脉,将中膜层剪碎并用%胶原蛋白酶消化畕∈保袢⊙管平滑肌细胞。加入含高糖和%呐嘌海邢赴脑、,,一、】—一\/
天可见细胞占瓶底面积%以上,,排列致密,边界不清,呈典型的“谷于峰”生长。传代后细胞生长良好,培养第四代的细胞经间接荧光抗体染色法染色,细胞呈荧光染色阳性。脱细胞基质的切片和扫描电镜示:经上述处理后,羊血管的细胞成分即内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞均被去除,而胶原纤维和弹性纤维仍然保持原来的形态和结构,基质呈网状和多孔状,孔径为I锪ρР舛ㄒ堑检测结果为:脱细胞基质所能承受的最大负载.±刃孪识鲎织所能承受的.±P。跎%。在蛋白凝胶电泳图上,可见脱细胞基质和新鲜动脉组织的电泳条带与标记物涸鞍譏Ⅱ型τ谕环肿恿克剑业缬咎醮幕叶戎捣治表明脱细胞基质与新鲜动脉组织的胶原蛋白偷南喽院基质为±.。胞基质,共同孵育后,细胞代谢旺盛,在基质上生长良好。组织病理切片表明:第一周,细胞已覆盖基质表面,基质中也有细胞生长,但较稀疏:第三周,基质中的细胞数增加,分散分布,但与正常血管组织比较,细胞排列较乱,分布尚不均匀。扫描电镜观察,,胞浆透亮。卜一—弧结论:采用胰蛋白酶消化、去垢剂怼⒗涠骋桓稍锏榷喔霾街璧姆法处理羊胸主动脉,制备血管脱细胞组织基质,去除了主要的抗原物质,大大降低了其免疫原性。脱细胞组织基质生物相容性好,易于细胞附着和生长,有良好的强度和弹性,符合临床应用的需要,这一研究结果为血管组织工程材料的应用提供了新方法和新思路。关麓词:脱细胞组织基质血管组织工程平滑肌细胞细胞种植以×痗细胞数、×痬赴ǘ龋交∠赴种灿谕严、/
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引言血管外科及心脏外科需要采用各种不同直径的血管移植物作为修补材料,临床已经应用的血管移植物包括自体血管、异体血管和人工高分子材料管道。自体血管组织相容性好、不产生免疫排异反应,是最为理想的血管移植物。可采用的自体血管有自体动脉和静脉。自身非必需动脉是极其有限的,、。异体血管包括异种血管和同种血管。异种血管来源自然非常丰富,但移植后会产生根强的超急免疫排异,因此未经处理