文档介绍：液相色谱教程液相色谱教程
液液相相色谱柱色谱柱
应应用用基础基础
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高效液相色谱柱简介
¡ 色谱柱是一根填满填料的管子
¡ 柱管的材料(塑料,玻璃,不锈钢…)和尺寸(内径,长短)不尽
相同
¡ 管内的填料更是种类繁多,主要分为两大类
—硅胶基质
—聚合物基质
¡ 色谱柱的性能主要取决于填料的性质和填充技术
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C18 填料的合成(1)
传统硅胶颗粒基质
合成步骤:
1. 合成硅胶基质
硅羟基 2. 键合配体(键合相)
3. 端基封口
Polyethoxysilane Tetraethoxysilane
(PEOS) (TEOS)
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C18 填料的合成(2)
键合相(配体):C18
端基封口基团
合成步骤:
残留硅羟基
1. 合成硅胶基质
2. 键合配体(键合相)
3. 端基封口
硅胶基质
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对色谱柱填料的了解(一)
¡ 键合相化学
—影响化合物的分离度:α
—不同键合相对不同种类的化合物分离不同
—可能导致色谱的分离机理不同
—如:C18、
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键合相色谱柱
¡ 以硅胶为基质,通过化学键合方式把碳十八、碳八、
胺基等基团联在基质上,作为固定相
¡ 优点∶
—固定相稳定,不易流失
—应用广泛,可使用多种溶剂
—消除硅羟基的不良影响
¡ 缺点∶
— pH值不能小于2(键合相水解)
—同样填料,各种牌号色谱柱不尽相同
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带有内嵌极性配体的色谱填料
§Waters Symmetry Shield RP18…
O Polar
Si Group
CH3 CH3
内嵌极性基团配体
(由一步合成过程而来)
O
Si
CH3 CH3
传统直链烷基配体
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不同色谱填料的选择性差异
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选择性差异来源
¡ 填料的品牌-不同硅胶颗粒基质
o 密度,表面积,孔径
o 纯度(残留硅羟基活性不同)
¡ 键合相的种类:C18,C8, Shield RP18…
¡ 不同 C18配体键合水平
o 单键键合,双键键合,三键键合
o 配体覆盖率(疏水性不同)
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对色谱柱填料的了解(二)
¡ 填料的端基封口
—封口残余硅羟基
—减少不可逆吸附或拖尾
—增加碳含量(% -1%)
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