文档介绍：学号
编号
研究类型
基础研究
分类号
Q51
毕业论文(设计)
Bachelor’s Thesis
论文题目
精氨酸激酶(AK)的提取与纯化
作者姓名
指导教师
所在院系
生物系
专业名称
生物科学
完成时间
2007年6月6日
主要符号对照表
AK 精氨酸激酶
大肠杆菌
IPTG 异丙基硫代-β-D-半乳糖苷
Kanamycin 卡拉霉素
CMC CM-Cellulose
S-100 SephacrylTM-100
2-mercaptoethanol 巯基乙醇
Glycine 甘氨酸
PMSF 苯甲基磺酰氟
EDTA 乙二胺四乙酸
NaN3 迭氮钠
Arg 精氨酸
ADP 二磷酸腺苷
ATP 三磷酸腺苷
h 小时
min 分钟
目录
1引言 1
(AK) 1
2
2实验试剂以及实验仪器: 5
5
8
3实验方法 9
9
9
IPTG诱导AK基因的表达 9
蛋白质提取 9
10
10
4结果与分析 12
AK诱导表达电泳图 12
蛋白质经CMC离子交换的层析谱图和电泳图 13
-100交换的层析谱图和电泳图 14
-sepharose阳离子交换的层析谱图和电泳图 16
AK经各步纯化后的SDS-PAGE电泳图谱 17
5讨论 18
参考文献: 20
精氨酸激酶(AK)的提取与纯化
摘要:精氨酸激酶(ATP:N-)存在无脊椎动物中,是参与细胞代谢的磷酸激酶。重组有AK基因的E. coli Rosetta,在含有50 μg/ml的卡纳霉素的LB培养基中培养。-, mM的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导培养3小时。加裂解液后用超声破壁离心取上清,得到精氨酸激酶粗提液。通过CM-Cellulose阳离子交换层析,SephacrylTM-100凝胶过滤层析,Q-Sepharose阴离子交换层析分离纯化得到电泳纯的精氨酸激酶。
关键词:精氨酸激酶提取与纯化
Extraction and Purification of Arginine Kinase
Abstract: Arginine kinase(ATP:L-arginine phosphotransferase EC ),plays an important role in cellular energy metabolism in invertebrate. E. coli Rosetta which contains binant AK gene was grown in LB medium containing kanamycin (Final concentration: 25 μg/mL). When absorbance at 600 nm value was between with , isopropyl β-D-thiogalactopyranoside was added to mM and the incubation was continued an addition 3 h. The cell was broken and centrifugated, then the crude cell extract was harvested. Furthermore it was purified by following three methods in turn: CM-Cellulose positive ion exchange chromatography, SephacrylTM-100gel filtrate chromatography, and Q-Sepharose anion exchange chromatography. A purified AK was found to be homogenous by SDS poly -acrylaminde gel electrophoresis.
Key words: arginine kinase extraction and purification
精氨酸激酶(AK)
的提取与纯化
1引言
(AK)
精氨酸激酶[1](AK)是一种磷酸原激酶,磷酸原是一种磷酸化的