文档介绍：实验五:卫生细菌的检验—细菌总数的测定
实验目的与要求:
学习并掌握水体中细菌总数的检验方法、检验的原理、检验的依据、数据处理和报告方法。
强化水体细菌总数检验的卫生意义知识。
二、基本原理
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多,它们对营养和其他生长条件的要求差别很大,不可能找到一种培养基在一种条件下,使水中所有的细菌均能生长繁殖,因此,以一定的培养基平板上生长出来的菌落,计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
三、器材
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基,灭菌水;
灭菌三角烧瓶,灭菌的带玻璃塞瓶,灭菌培养皿,灭菌吸管,灭菌试管,培养箱等。
四、操作步骤

(1)自来水先将自来水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌,再开放水龙头使水流5分钟后,以灭菌三角烧瓶接取水样,以待分析。
(2)池水、河水或湖水应取距水面10—15cm的深层水样,先将灭菌的带玻璃塞瓶,瓶口向下浸入水中,然后翻转过来,除去玻璃塞,水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好,再从水中取出,最好立即检查,否则需放入冰箱中保存。

(1)自来水
(a)用灭菌吸管吸取1ml水样,注入灭菌培养皿中。共做两个平皿。
(b)分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基,并立即在桌上作平面旋摇,使水样与培养基充分混匀。
(c)另取一空的灭菌培养皿,倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15ml,作空白对照。
(d)培养基凝固后,倒置于37℃温箱中,培养24小时,进行菌落计数。
两个平板的平均菌落数即为1ml水样的细菌总数。
(2)池水、河水或湖水等
(a)稀释水样取3个灭菌空试管,分别加入9ml灭菌水。取1ml水样注入第一管9ml灭菌水内,摇匀,再自第一管取1ml至下一管灭菌水内,如此稀释到第三管,稀释度分别为10-1、10-2与10-3。稀释倍数看水样污浊程度而定,以培养后平板的菌落数在30—300个之间的稀释度最为合适,若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数,则需继续稀释或减小稀释倍数。一般中等污秽水样,取10-1、10-2、10-3三个连续稀释度,污秽严重的取10-2、10-3、10-4三个连续稀释度。
(b)自最后三个稀释度的试管中各取1ml稀释水加入空的灭菌培养皿中,每一稀释度做两个培养皿。
(c)各倾注15ml已溶化并冷却至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基,立即放在桌上摇匀。
(d)凝固后倒置于37℃