文档介绍：上海交通大学
硕士学位论文
质粒介导的大肠埃希菌和克雷伯菌的喹诺酮耐药研究
姓名:孙康德
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:倪语星;蒋燕群
20070501
质粒介导的大肠埃希菌和克雷伯菌的喹诺酮耐药研究

摘要

[目的] 了解临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性,为临
床用药提供依据。了解上海地区临床分离大肠埃希菌和克雷伯菌的 qnr
基因的分布以及Ⅰ类、Ⅱ类整合酶基因的存在情况,研究上述细菌中喹
诺酮类药物的耐药机制,阐明质粒介导的水平传播在细菌耐喹诺酮类药
物中所起的作用和意义。
[方法] 收集我院 05 年临床分离的 153 株大肠埃希菌和 157 株肺炎
克雷伯菌,采用全自动细菌鉴定仪 VITEK 系统进行最低抑菌浓度(MIC)
的测定;在 VITEK 系统上筛选 ESBLs,再用 CLSI 纸片法确证。收集上海
四家综合性医院临床分离的 267 株大肠埃希菌和 59 株克雷伯菌(其中产
酸雷伯菌 4 株)对质粒介导的喹诺酮类药物的耐药机制进行研究:1)采
用全自动细菌鉴定仪 VITEK 系统进行鉴定,用微量稀释法进行最低抑菌
浓度(MIC)的测定;2)采用聚合酶链反应(PCR)进行 qnr 基因筛选;
3)采用聚合酶链反应(PCR)进行Ⅰ类、Ⅱ类整合酶基因检测;4)采用
聚合酶链反应(PCR)进行超广谱内酰胺酶(ESBLs)基因型的检测;5)采
用荧光标记测序法对 qnr 基因阳性菌株的 qnr 基因以及Ⅰ类整合酶基因
进行测序;6)采用接合试验对 qnr 基因阳性菌株进行耐药质粒水平传播
的研究;7)采用纸片扩散法和琼脂稀释法进行接合子的稳定性试验。
[结果] 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对β内酰胺类、氨基糖苷类和
氟喹喏酮类等抗菌药物均有较高的耐药性,平均在 60%以上。产 ESBLs
菌株对多种抗菌药物耐药率显著高于非产 ESBLs 菌株。大肠埃希菌和肺
炎克雷伯菌的 ESBLs 阳性率分别为 %和 %。在 267 株大肠埃希
菌和 59 株克雷伯菌中有 3 株携带 qnr 基因,其中 1 株为大肠埃希菌,占
%,2 株为肺炎克雷伯菌,占 %;在 135 株大肠埃希菌和 59 株
克雷伯菌中检出 105 株细菌携带Ⅰ类整合酶基因,其中 72 株为大肠埃希
菌,占 %(72/135),33 株肺炎克雷伯菌,占 %(33/59),
其中携带 II 类整合酶基因 3 株,全部为大肠埃希菌,此 3 株同时携带 I
类整合酶基因并产 ESBLs;3 株 qnr 基因阳性菌株均携带Ⅰ类整合酶基因
和产超广谱内酰胺酶基因且呈多重耐药;3 株 qnr 基因阳性菌株都携带
超广谱内酰胺酶(ESBLs) TEM 基因型,都不携带 CTX-M 基因型,其中 2
株携带 SHV 基因型;通过分子生物学方法可证明 qnr 基因位于Ⅰ类整合
子上;3 株 qnr 基因阳性菌株的接合试验均成功,qnr 基因在接合子中相
对稳定。
[结论] 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物耐药率较高,
而且产 ESBLs 菌株高于非产 ESBLs 菌株。因此临床医生应合理使用抗生
素,降低 ESBLs 的发生率,避免多重耐药的常见菌在院内传播。对所收
集大肠埃希菌和克雷伯菌中检出 3 株细菌携带 qnr 基因,其阳性率并不
高。qnr 基因阳性菌株均为产超广谱内酰胺酶(ESBLs)且呈多重耐药菌株。
qnr 基因位于Ⅰ类整合子上,可以通过质粒介导的水平传播,在接合子
中是相对稳定。qnr 基因的水平传播对临床细菌的喹诺酮耐药有重大意
义,它可以跨种属广泛传递,导致耐药性播散,因此,检测 qnr 基因,
掌握本地区 qnr 基因的流行情况是十分必要的,临床医学工作者应予以
高度重视,并采取积极措施,预防和控制质粒(qnr)介导的喹诺酮耐药
菌株的播散。

[关键词] 喹诺酮类耐药,qnr 基因,整合子
超广谱内酰胺酶,聚合酶链反应
STUDY OF PLASMID-MEDIATED QUINOLONE RESISTANCE
IN ESCHERICHIA COLI AND KLEBSIELLA

ABSTRACT

[Objective] To investigate the resistance in clinical isolates of
Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae for reasonable antimicrobial
agent