文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
自体组织工程化皮肤修复全层皮肤缺损的实验研究
姓名:蔡霞
申请学位级别:博士
专业:整复外科
指导教师:关文祥
中英文词汇对照表英文中文烧伤生物相容性Ⅳ型胶原桥粒半桥粒角朊细胞皮肤缺损创伤愈合组织工程细胞外基质聚羟基乙酸氧化异丙烯聚乳酸磷酸盐缓冲液胎牛血清表皮真皮基底膜Ⅶ型胶原透明板基底板成纤维细胞胶原胰蛋白酶胶原酶博士学位论文狟
透射电镜乙二胺四乙酸表皮细胞生长因子角蛋白层粘素免疫化学免疫细胞化学免疫组织化学扫描电镜张力丝博士学位论文
自体组织工程化廛量叁±箜复全层廛毖鳢查匿舶实验研究中文详细摘要竺婊丈擞肫し袈岳Q袷橇俅渤< ⒍喾⒉。渲瘟剖峭饪颇想的治疗方法,狙芯康哪康氖翘剿饔τ米橹こ碳际踉偕し簟⑿薷慈牧嫌敕椒ǎ皇笛槎镅∮贸し阍咏蛔兄恚「共科し簦赶ɑ袢”石状排列。表皮细胞特异性表达蛋白——角蛋白免疫细胞化学检测到细胞题之一。应用真皮替代物虽可减少创面收缩与瘢痕形成,但由于缺少表皮成分,易罹患感染与水电解质代谢紊乱,只能作为暂时性覆盖。单纯表皮细胞膜片移植则存在移植物菲薄易碎,操作困难;耗时长,从取材到临床应用需周;同时由于缺乏真皮组织,存在创面愈合后瘢痕增生严重,抗感染能力差,弹性欠佳,柔软度不足,不耐磨等缺点。因此,目前尚无理层皮肤缺损的方法。皮细胞与成纤维细胞,在体外原代培养,通过细胞形态观察、免疫细胞化学与原位杂交等方法对细胞进行鉴定;另将部分细胞接种聚羟基乙酸,支架,体外培养两周观察该材料是否对细胞产生毒副作用;将培养一周处于对数生长期的表皮细胞、成纤维细胞与%氧化异丙烯煸瘸上赴汉螅直鸾又钟诹娇槲编织的细胞接种密度分别为:表皮细胞/上宋赴/,,直接用于修复自体背部直径的全层皮肤缺损。以单纯生物材料覆盖的创面作为阴性对照组,不予任何处理的创面作为空白对照组。修复术后,周取材,通过大体、组织学、免疫组织化学、电镜和生物力学等方法对新生组织进行评价。另取部分动物在上述方法基础上,同时移植自体毛囊,移植周后取材,从大体、组织学和电镜等方面观察新生组织。结果:⒈砥は赴诮又笾鸾ヌ冢J佳诱梗天后出现由多个细胞构成的细胞榘落,.天,细胞达汇合状态,呈典型的铺路博士学位论文
成,免疫组织化学显示基底膜的主要成分——层粘连蛋白、Ⅳ型胶原和Ⅶ细胞在险掣缴ぃ⒎置谙赴饣省、细胞~生物材料复合物胞浆内存在棕黄色阳性颗粒。成纤维细胞在接种后J继冢后内型胶原蛋自与型前胶原阳性。⒈砥は赴氤上宋植入创面后第一周,肉眼见实验组创面呈均匀鲜红色,表面光滑,组织学示新生组织分表皮与真皮两部分,表皮突较少,真皮内胶原细小,排列紊乱,成纤维细胞量多,基底膜特殊染色与电镜观察到连续的基底膜已经形型胶原阳性。生物力学测定显示抗拉伸强度达正常皮肤的%。第二周时,实验组创面呈红色,无颗粒感,新生组织的表皮较前增厚,表皮突增多增粗,表皮与真皮以指状突起互相交错镶嵌,真皮层成纤维细胞数量未见减少,胶原较前稍粗大,含量增多,基底膜特殊染色与电镜观察到连续的基底膜,免疫组化检测到层粘连蛋白、Ⅳ型胶原和Ⅶ型胶原。生物力学显示抗拉伸强度达正常皮肤的%。第四周时,实验组表面被覆一层薄薄的上皮组织,质地较软,有弹性。新生表皮突明显较前粗大,深嵌入真皮中。真皮分乳头层与网状层,成纤维细胞含量减少,电镜下见到呈凋亡样改变的成纤维细胞。基底膜特殊染色与电镜均观察到连续的基底膜,层粘连蛋白、Ⅳ型胶原和Ⅶ型胶原免疫组化阳性。,有弹性。组织学示表皮的细胞层次明显减少,厚度变薄,表皮突回缩,与正常皮肤组织的表皮突形态相似。真皮层胶原粗大,排列与正常皮肤接近。此时,无论基底膜特殊染色还是免疫组化,均呈阳性反应。,仅见大量成纤维细胞、胶原与炎性细胞杂乱排列。⑾赴生物材料抑踩氪疵婧笏闹埽缇倒察到连续的基底膜,组织学显示新生组织分表皮与真皮,真皮内存在毛囊结论:①原代培养的皮肤表皮细胞与成纤维细胞能够作为组织工程化皮肤的种子细胞。②表皮细胞与成纤维细胞以VЪ埽谄渲屑绦鲋常向两极伸展,、指纹状或放射状。免疫细胞化学与原位杂交检测到细胞结构。广√/博士学位论文
皮肤组织并十謦—、细胞形态与功能正常。③狿赴春咸逶诰哂姓C庖吖δ艿动物体内能够形成含表皮与真皮结构的组织工程化皮肤组织。④应用组织工程技术能够从结构和功能上修复自体全层皮肤缺损。⑤新生的组织工程化皮肤组织在大体、组织学、生物化学和生物力学等方面均与正常皮肤组织相似。⑥采用为细胞载体可以构建含毛囊的组织工程化复合皮肤组