文档介绍：大鼠胰高血糖素样肽1(Glp-1)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
厦门慧嘉生物科技有限公司
本试剂盒仅供研究使用
检测范围: ng/ml - 50 ng/ml
最低检测限: ng/ml
特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的大鼠Glp-1,且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期:6个月
预期应用:ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中Glp-1含量。
说明
:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
,稀释时可在水浴中加温助溶。
、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗Glp-1抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗Glp-1抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Glp-1呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
需要而未提供的试剂和器材
标准规格酶标仪
高速离心机
电热恒温培养箱
干净的试管和Eppendof管
系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
6. 蒸馏水,容量瓶等
标本的采集及保存
血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
细胞培养物上清或其它生物标本:1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则:
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。最后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本