文档介绍：油镜的使用和维护
目的:掌握油镜的使用与维护,熟悉油镜的使用原理。
材料:显微镜,拭镜纸,液体石蜡油,二甲苯
原理:油镜的透镜极小,工作焦距最短,光线通过玻璃和空气,由于介质密度不同发生折射,射入镜筒的光线极少,视野暗,物象不清晰。如在玻片与镜头(透镜)之间加上折光率和玻片(n=)相近的香柏油(n=)就可减少光线的折射,加强视野的亮度,获得清晰的物象。
步骤:显微镜油镜的使用和维护
。识别油镜头:标有100×、OIL、HI等字样。
2. 打开电源,用低倍镜对光,打开光圈,调节聚光镜的位置,使视野光线充足。
3. 标本上加镜油一滴,转动粗螺旋,使油镜头缓缓下降,用眼从侧面观察,直到油镜头浸入油中接近玻片为止。
4. 从目镜观察,同时徐徐转动粗螺旋提升,见模糊物象后再用细螺旋调节,直到见到清晰物象为止。
5. 观察完毕,粗螺旋提高镜头,取下标本片,油镜头使用后立即用擦镜纸擦净镜头上的油。如油已干,可在擦镜纸上滴少许二甲苯擦拭,并立即用另一擦镜纸擦去二甲苯,因二甲苯能溶解镜头上的固定胶以致使镜头脱落。

“八”字,调低聚光器,对号送入柜子内存放。

革兰染色
目的:掌握革兰染色的原理及操作。
材料:干净玻片,接种环,葡萄球菌和大肠杆菌18-24h培养后的混合菌液,酒精灯,一套革兰染液
原理:主要为细胞壁结构的差异。G+三维肽聚糖结构的交联度大,通透性低,脂质少或无,酒精作用使孔径缩小;而G-肽聚糖为二维疏松结构,薄,外膜含大量脂质,易被酒精溶解,使细胞壁通透性增高,结晶紫-碘复合物被酒精溶解而脱色。
步骤:
1. 细菌标本的制作
(1)涂片:无菌操作。取一接种环混合细菌悬液,涂布成直径约1cm的涂片,涂片应薄而均匀。
(2)干燥:涂片最好在室温中自然干燥。必要时可将标本面向上,放在酒精灯上方微火处干燥。
(3)固定:标本面向上,在酒精灯火焰外焰按钟摆的速度来回通过3次,放置待冷后染色。固定的目的是杀死细菌,使细菌与玻片黏附较牢固。菌体蛋白质变性后,提高与染料的亲和力。
2. 革兰染色
(1)初染:滴加结晶紫染液1-2滴于涂片上,1min钟后用自来水缓缓冲洗。
(2)媒染:滴加碘液1-2滴,1min后用自来水缓缓冲洗。
(3)脱色:加95%酒精数滴,摆动玻片使酒精与细菌充分接触,约20-30s后,立即用自来水缓缓冲洗。
(4)复染:滴加稀释碳酸品红液,30-60s后,自来水缓缓冲洗。
用吸水纸吸干后,用油镜观察。镜检后,载片放入消毒缸。

细菌特殊结构的观察
目的:观察并掌握细菌的形态及特殊结构。
材料:细菌鞭毛、芽孢、荚膜的标本片;革兰阳性菌、革兰阴性菌染色标本片
示教:
革兰阳性菌:葡萄球菌,紫色
革兰阴性菌:大肠杆菌,红色
细菌鞭毛
细菌芽孢
细菌荚膜

细菌的分布
目的:了解细菌在自然界中的分布情况。
材料: 普通琼脂平板培养基、血平板、镊子、无菌棉拭子、革兰染液。
操作步骤:

(1)采用沉降法:取普通琼脂平板培养基1只,任意置一处,启盖约15分钟,再盖上,37oC培养24小时,观察有无细菌生长。
(2)结果判定:培养基表面可见多种大小、形态不一的菌落。
2. 皮肤表面细茵检查
(1)采用涂抹法: 先在平板底面用记号笔分成两区,作标记,将未消毒的手指在平板的1/2处表面轻轻涂抹划线,然后用碘酒、乙醇擦拭手指皮肤,用消毒后的手指在平板另一1/2处进行涂抹,操作完毕,置37℃培养24小时后,取出观察结果。
(2)结果判定:培养基表面有几种大小及形态不同的菌落生长,注意比较消毒前后细菌的生长情况。

(1)用无菌棉拭子在咽喉部涂抹后,涂在血平板上,并划线分离,37oC培养24小时后观察结果。注意观察平板上菌落种类以及是否有溶血现象,并可挑取菌落进行革兰染色检查。口腔微生物检查也可用无菌牙签直接挑取少量牙垢,制成涂片,进行革兰染色检查。
(2)结果判定:血平板表面有大小和形态不同的菌落,有的菌落周围可见溶血环。牙垢涂片镜检可见革兰阳性菌和革兰阴性菌。

紫外线杀菌实验
目的:掌握紫外线杀菌的原理,熟悉紫外线杀菌实验的操作。材料:大肠杆菌,琼脂平板,无菌回形状纸片,接种环,镊子,紫外灯.
原理:紫外线波长范围为240~280nm,最适的波长为260nm,这与DNA吸收光谱范围相一致。其杀菌原理是紫外线易被核蛋白吸收,使DNA的同一条螺旋体上相邻的碱基形成胸腺嘧啶二聚体,从而干拢DNA的复制,导致细菌死亡或变异。紫外线特点:紫外线的穿透能力弱,不能通过普通玻璃、尘埃。
步骤:
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