文档介绍：一、目的与要求
了解血球计数板计数的原理,学会测定细胞总数方法。
二、原理
用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。血球计数板是一块特制的厚载玻片,其上由四条槽构成三个平台,中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半,每一边的平台上各刻有一个方格网,每个方格网共分为9个大方格,中间的大方格即为计数室。计数室的刻度一般有两种规格,一种是一个大方格分成16个中方格,每个中方格又分成25个小格(即16x25),另一种是一个大方格分成25个中方格,每个中方格又分为16个小方格(即25×16),但无论是哪一种规格的计数板,每一个大方格中的小方格都是400个,每一个大方格边长为1 mm,则每一个大方格的面积为1 mm2,盖上盖玻片后,, mm3
三、血球计数板的使用方法
(一)菌悬液的制备为便于计数,对样品进行适当稀释,稀释程度以每小格内含5~10个酵母为宜,可采用10倍系列稀释法。
(二)加菌悬液样品将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片,再用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴,让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室,用吸水纸吸去多余水液。由盖玻片边缘或槽内加入计数板来回推压盖玻片,使其紧贴在计数板上,计数室内不能有气泡。静置5-10分钟。
(三)显微镜计数在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数,上下调动细螺旋,以便看到小室内不同深度的菌体。位于分格线上的菌体,只数两条边上的,其余两边不计数。如数上线就不数下线,数左边线就不数右边线。当芽孢菌体达到母细胞大小的二分之一时,可记作两个细胞。
(四)计数时若使用刻度为25×16(大格)的计数板,则数四角的4个大格(即100小格)内的菌数。如用刻度为16×25(大格)的计数板,除数四角的4个大格外,还需数中央1个大格的菌数(即80小格)。每小格中菌数以5-10个为宜,如菌液过浓可适当稀释。
(五)每个样品重复计数2-3次,取其平均值,按下式计算样品中的菌数。
(六)计数完毕,将计数板在水龙头下冲洗干净,切勿用硬物洗刷,洗完后自行晾干或用电吹风吹干。