实验六 目的基因的PCR扩增--精品PPT课件.ppt

文档介绍：实验六目的基因的PCR扩增
一、实验目的
通过本实验学****PCR反应的基本原理,掌握PCR的基本操作技术以及琼脂糖凝胶电泳技术。
PCR(polymerase chain reaction) :
聚合酶链式反应,又称体外DNA扩增技术。
是一种体外扩增特异DN***段的技术。
二、实验原理
二、实验原理
PCR用于扩增位于两端已知序列之间的DNA区段,即通过引物延伸而进行的重复双向DNA合成。基本原理及过程如下:
PCR循环过程中有三种不同的事件发生:(1)模板变性
(2)引物退火
(3)热稳定DNA聚合酶进行DNA延伸合成。
二、实验原理
1、变性:加热使模板DNA在高温下(94-95℃)变性,双
链间的氢键断裂而形成两条单链,即变性阶段。
2、退火:在体系温度降至37-65℃,模板DNA与引物按碱基
配对原则互补结合,使引物与模板链3’端结合,形成部分
双链DNA,即退火阶段。
3、延伸:体系反应温度升至中温72℃,耐热DNA聚合酶以单
链DNA为模板,在引物的引导下,利用反应混合物中的4
种脱氧核苷三磷酸(dNTP),按5’到3’方向复制出互补
DNA,即引物的延伸阶段。
5’
3’
3’
5’
高温变性
低温退火
中温延伸
不断循环
聚合酶链式反应示意图
目的片段
模板
引物对
二、实验原理
上述3步为一个循环,即高温变性、低温退火、中温延伸3个阶段。从理论上讲,每经过一个循环,样本中的DNA量应该增加一倍,新形成的链又可成为新一轮循环的模板,经过25~30个循环后DNA可扩增106~109倍。
典型的PCR反应体系由如下组分组成:DNA模板、反应缓冲液、dNTP、MgCl2、两条合成的DNA引物、耐热DNA Taq聚合酶。
PCR 的基本反应步骤
变性
95˚C
延伸
72˚C
退火
Tm-5˚C
二、实验原理
二、实验原理
二、实验原理