实验六目的基因的PCR扩增.ppt

文档介绍：实验六目的基因的PCR扩增
实验目的
通过本实验学****PCR反应的基本原理,掌握
PCR的基本操作技术以及琼脂糖凝胶电泳技术
二、实验原理
PCr (polymerase chain reaction):
聚合酶链式反应,又称体外DNA扩增技术。
是一种体外扩增特异DN***段的技术。
二、实验原理
PCR用于扩增位于两端已知序列之间的
DNA区段,即通过引物延伸而进行的重复双向
DNA合成。基本原理及过程如下
PCR循环过程中有三种不同的事件发生:
(1)模板变性
(2)引物退火
(3)热稳定DNA聚合酶进行DNA延伸合成
、实验原理
、变性:加热使模板DNA在高温下(94-95℃)变性,双
链间的氢键断裂而形成两条单链,即变性阶段
2、退火:在体系温度降至37-65℃,模板DNA与引物按碱基
配对原则互补结合,使引物与模板链3'端结合,形成部分
双链DNA,即退火阶段。
3、延伸:体系反应温度升至中温72℃,耐热DNA聚合酶以单
链DNA为模板,在引物的引导下,利用反应混合物中的4
种脱氧核苷三磷酸(dNTP),按5”到3方向复制出互补
DNA,即引物的延伸阶段
高温变性
引物对
低温退火
中温延伸
:=:=:=:
不断循环
目的片段=::;:=:=
:=:=:=:=:
聚合酶链式反应示意图
二、实验原理
上述3步为一个循环,即高温变性、低温退火
中温延伸3个阶段。从理论上讲,每经过一个循环,
样本中的DNA量应该增加一倍,新形成的链又可成
为新一轮循环的模板,经过25~30个循环后DNA可
扩增106~10°倍。
典型的PCR反应体系由如下组分组成:DNA模
板、反应缓冲液、dNTP、MgCl2、两条合成的DNA
引物、耐热 DNA Taq聚合酶
二、实验原理
PCR的基本反应步骤
变性
95°C
延伸
退火
72°C
Tm-5C
二、实验原理
PQR技术原理
Template DN
Primer 1
Cvcle 1
可D回
二、实验原理
25~30次循环后,模板DNA的含量
可以扩大100万倍以上