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二0 年月
论文作者签名:至盔圣垄望:叠:争中国医科大学研究生学位论文独创性声明中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书校可以公布学位论文的全部或部分内容C苣谌莩,以采用影印、缩指导教师签名:本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。日期:本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学,且导师为通讯作者,通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学印或其他手段保存论文。论文作者签名:期:日
在大鼠骨骼肌挫伤愈合过程中的表达及其时间规律性研究譸鹪谋泶锝醒芯浚靡酝撇鈉唧鹪在骨骼肌挫伤愈合过程中的生物材料和方法一、动物模型的建立和分组·中文论著摘要·刖细胞凋亡浅绦蚧赴劳受一系列基因调控的生理性细胞死亡方式。目前,已经研究了多种组织、细胞的凋亡现象,骨骼肌细胞凋亡的研究也取得了一定的进展。一方面,骨骼肌细胞凋亡在维持骨骼肌正常生长发育成熟过程中必不可少;另一方面,细胞凋亡异常与多种骨骼肌损伤和疾病的发生、发展机制有关。研究证明,骨骼肌挫伤后,会发生肌纤维损伤造成的肌源性去神经支配和神经轴突损伤导致的神经源性去神经支配。大量研究已经证实,凋亡在骨骼肌去神经性萎缩中起重要作用。謕硒易迨怯盏枷赴蛲龅闹匾5牡鞍酌浮=昀此孀哦缘蛲鲂藕抛5通路研究的进一步深入,的作用受到重视。研究发现,琾嬲是导致细胞凋亡的最强大的效应因子。但骨骼肌挫伤愈合过程中是否表达嬲,目前国内外尚未见研究报道。本实验在建立大鼠骨骼肌挫伤模型的基础上,应用免疫组织化学染色技术、技术以及活性测定技术对大鼠骨骼肌挫伤愈合过程中学作用,并对其表达时间变化规律在推断损伤时间中的可应用性进行了探讨。健康成年的雄性笫唬逯芍泄医科大学实验动物中心提供。随机分为组,每组唬渲组为实验组,吾的过程,
什级粜:阳性面积在%ブ洌回中度阳性貉粜悦婊二、免疫组织化学染色实验步骤结果判断阳性结果分析%.%之问;抖强阳性貉粜悦婊%。统计学分析组为对照组。实验组大鼠用ノ彀捅韧啄痥逯腹腔注射麻醉后,参照等的大鼠骨骼肌急性钝挫伤模型制作方法,将大鼠后肢置于伸膝、踝背屈。,以重金属柱体,从高处自由垂直落下打击动物右小腿骨骼肌喔.,解剖证实挫伤率ァC恐皇蠓笼饲养并给予专用饲料及蒸馏水,保持垫料清洁及空气通畅。于损伤后、、和ù笫笸丫弊荡λ溃∮蚁轮ù焐饲爸鼙咔骨骼肌,对照组取相同部位骨骼肌。每组迅速放入ザ嗑奂兹疨中固定切片脱蜡至水;⒉ǚㄐ薷纯乖徽Q蚍敲庖哐G宸獗眨煌每鼠嗫寺抗体倍稀释,瓹过夜:生物素化山羊抗兔抗体;试剂:陨漳舅亟泻烁慈尽⑼阉⑼该鳌⒅行允鹘封片。同时进行常规染色。抗体购自美国公司,免疫组织化学试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。阳性表达于细胞浆内,呈棕黄色。免疫组化结果用图像分析系统采集照片。挫伤周边区:显微镜倍下,在每张切片中随机选择个视野,以骨骼肌细胞胞浆中出现棕色颗粒为阳性信号,测定其阳性面积及积分光密度值。挫伤区及挫伤交界区:显微镜倍下,在每张切片中随机选择个视野,以细胞胞浆中出现棕色颗粒为阳性信号,进行定性分析。定性分析标准如下:.级跣:细胞内无棕黄色颗粒沉着;弱阳性貉粜悦婊ブ剩笫瘢谱穸仁衅/。
实验结果觳四、钚圆舛一、挫伤组骨骼肌病理组织学变化二、挫伤周边区拿庖咦橹旧三、腤实验步骤结果判断各损伤时间组数据应用臣迫砑捎玫ヒ蛩胤讲罘治龇椒ń型臣法蛋白质定量;电泳,总蛋白经%狿掷耄蛔S至膜上;抗原封闭,采用含%的ネ阎谭鄯獗找海煌每大鼠固宸跤簧窖蚩雇肐抗体孵育;在胶片上,难粜员泶镂:谏状状呐ǖ按笮〈肀泶的强弱,以D诓危扑闫湎喽曰止饷芏戎怠法进行蛋白定量;将所有样品管用裂解液稀释为统一的蛋白浓度./;取稀释后液体,各加入反应缓冲液疞新鲜测定在波长Φ腛值;计算各损伤组相对对照组的活性倍增值。量多核粒细胞。部分骨骼肌胞浆均质化,细胞核消失,骨骼肌问隙内炎细胞增多。焐说墓趋兰〖湎都爸鼙叱鱿纸隙嗔康难紫赴焐说墓趋兰〖湎及周边大量的炎细胞。损伤处有大量的细胞核出现。天可见肌细胞核增殖,核均位于细胞中央。新形成的肌细胞进一步增多,可见胶原形成。偕程更近一步,部分区域可见较多