文档介绍：优
秀
毕
业
设
计
论
文
二0 年月
法医级刘莹硕士论文
第一部分
广西都安瑶族线拉体控制区多态性研究食
研究生刘莹
导师陈国弟到教授
四川大学华西基袖医学与法医学院
四川成都
漪要目的为线粒体法医学应
用提供群体遗传学数据,扩大在个体识别中的应用范围。方法以
南方民族瑶族为研究对象,根据控制区及周围区域的序列设计
引物,用产物直接测序对,份无关瑶族样本控制区进
行了测序,通过和软件分析比对,
得到的序列结果,计算瑶族单倍型的识别率,并应用
软件对数据做进化距离分析,构建系统发育树。结果对样本的
控制区序列进行了统计分析,共检出个变异点,平均变异数,
个,发现处点异质性。整个序列个体识别率为,变异度为
。除了、及外,发现瑶族控制区还存
在其它的相对高变区。瑶族控制区序列与其他民族相比,均存
在一定差异。系统发育树显示,瑶族大体出现个聚类簇,每个聚类簇
各有特点。结论瑶族控制区检出个点异质性,并发现存在
其他相对高变区。群体遗传学数据提示瑶族与蒙古人种有较近的亲缘关
系。本研究为法医学及系统发育学研究提供了基础的群体遗传学数据。
关键词】线粒体,控制区,多态性,瑶族,法医学
本研究为年北京市科学技术委员会“线粒体测序技术在法医学中的应用”立项的
子课题。
第一部分广西都安璐族线粗体控制区多态性研究
衍
,
法医饭刘莹硕士论丈
,
第一部分广西都安瑶族线粒体拉制区多态性研究
目前,对国内少数民族的报道多为系统发育学研究,研究
范围常局限于高变区,可为法医学所用的基础遗传学
数据较少。为给法医学分析提供更充实的群体遗传学数据,扩
大应用人群范围,本研究选择具有一定代表性的少数民族—
瑶族个体作为检测对象,根据唐晖等】设计的引物,对控制区
及周围区域,多个碱基进行了检测。
材料与方法
一、材料
样本采集
在广西都安瑶族自治县采集瑶族个体静脉血样份,检材抗凝,
自然静置,分离白细胞,℃保存。所选对象均为无关健康个体,代
内无族外通婚史。民族归属及家系情况由采集个体提供。
主要试剂
引物
引物由上海基康生物技术公司合成测序区域序列及引物位置见附
录。
下丁
法医级夕」莹硕士论文
一
,一〕
主要试剂
酶产物
纯化试剂盒
试剂盒丙烯酞胺一二甲双丙烯酞胺
尿素其余试剂均为国产分析纯。
主要仪器设备
序列分析仪,美国扩增仪
,美国离心机,德国超净作台,新加
坡小型潜水式凝胶电泳仪,日本透射型紫外灯
美国宝利来一次成像照相机尸,美国干热器日,美
国微量可调加样器,法国。
分析软件
软件,美国软件
,美国匕对软件,美国,美国。
第一部分广西都安璐族线粗体控制区多态性研究
二、方法
,提取
酚一氯仿法见附录提取,千燥后溶于,阔缓冲液中,
℃保存备用。
的扩增
每个样本分别在个扩增管中同时扩增不同大小的个片段。
反应体系为阔,反应混合物中包括以下成分’端及’端引物各
缓冲液
聚合酶及模板约
循环参数为
个循环
扩增产物的半定量
扩增产物通过琼脂糖凝胶含。电泳分离,
判断产物的有无,并用已知浓度浓度为,扣进行产
物的半定量。电极间距离,加样样本,
。电泳条件电极缓冲液
凝胶成像系统记录结果。
扩增产物的纯化
将扩增产物移至,离心管内,加入纯化缓冲液
和,纯化树脂,室温放置分钟,期间振荡次,每次振荡
间隔,分钟以上。
将纯化柱装在注射器上,拔除注射器栓,移入
树脂混合物,装上栓子,缓慢推动,使树脂进入纯化柱。