高效液相色谱仪.ppt

文档介绍：第一部分高效液相色谱仪及简单操作维护
HPLC技术的发展过程
HPLC是经典液相色谱的发展,同时是气相色谱理论的扩展和延伸。
二十世纪60年代末期生产出商品化液相色谱仪,其发展非常快速,经过30多年的努力已成为分离学科中的骨干技术。
目前,HPLC技术已趋于成熟。
特点:采用高压泵、高效填料、高灵敏度检测器实现了快速、高效和操作自动化。
HPLC和经典液相色谱法的比较
高效液相色谱法
经典液相色谱法
色谱柱柱长/cm
10~25
10~200
色谱柱柱内径/mm
2~10(不锈钢管)
10~50(玻璃管)
固定相粒度(粒径μm)
3~50
75~600
流动相流动方式
高压输液泵压入
靠重力流入
溶液的传质、扩散速度
快
缓慢
色谱柱入口压力/MPa
2 ~20
~
色谱柱柱效/(理论塔板数/m)
2*103 ~ 5*104
2 ~ 50
进样量/(g)
10-6 ~ 10-2
1~10
分析时间/h
~
1 ~ 20
高效液相色谱法的特点
(1)分离效能高:柱效可达5000~30000块/米
(2)选择性高:通过流动相的控制来改善分离过程的选择性
(3)检测灵敏度高:
UV—最小检出量可以达到10-9 g
FD--最小检出量可以达到10-12 g
(4)分析速度快:采用了高压泵
流动相和储液罐
(1)储液罐
材质:玻璃、不锈钢、氟塑料或特种塑料聚醚醚酮(PEEK)
棕色玻璃瓶会避免藻类的生长
容积:~
放置位置:高于泵体,保持一定的输液静压差
注意:密封、过滤
(2)流动相----使用限制
避免使用下述可腐蚀钢铁的溶剂:
碱金属卤化物及其酸溶液,如:碘化锂、氯化钾等
高浓度无机酸,如硝酸、硫酸.
可能含有过氧化物的色谱纯醚(如THF、二氧六环、二丙基乙醚)
在使用前必须用干燥氧化铝过滤除去过氧化物
含强络合剂的溶液,如EDTA,乙二胺四乙酸
四氯化碳与2-异丙醇或四氢呋喃的混合液
(2)流动相----过滤
流动相过滤的目的
过滤去除可能存在的微小固体颗粒
保护色谱高压泵和色谱柱
流动相过滤方法
在线溶剂过滤
抽真空过滤
流动相在线过滤:
清洁方法:
1、用水冲洗残留溶剂后,将过滤器放在约35%浓硝酸里浸一小时
2、用二次蒸馏水彻底冲洗过滤器
3、将过滤器重新装好。
4、定期清洗溶剂过滤器及溶剂瓶
(每1~3个月至少清洗一次)
不能用超声波清洗
流动相抽真空过滤
过滤用膜:水系和有机,
孔径:µµm