文档介绍：酵母菌的染色与观察
摘要:本实验通过用美蓝染色制成水浸片来观察酵母形态和出芽生殖方式,并区分酵母菌死活细胞。以生长在麦氏培养基上的酿酒酵母为材料,采用Schaeffer-Fulton氏染色法,进行子囊孢子的观察。
关键词:酵母菌水浸片法子囊孢子出芽生殖
前言
酵母菌是单细胞的真核微生物,细胞核和细胞质有明且分化,个体比细菌大得多。酵母菌的形态通常有球状、卵圆状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。酵母菌的无性繁殖有芽殖、裂殖和产生孢子;酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。美蓝为无毒性染料,其氧化型为蓝色,而还原型为无色。用它对酵母菌染色时,由于活细胞的新陈代谢作用,使细胞内具有较强的还原能力,能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型,所以酵母的活细胞无色;对于死细胞或代谢缓慢的老细胞,则因它们无此还原能力或还原能力极弱,而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此,用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态,还可以区分死、活细胞。
子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。在酵母菌中,能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件,所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。麦氏(McClary) 培养基( 葡萄糖-醋酸钠培养基) 有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。
1材料

酿酒酵母麦氏琼脂斜面培养物。

葡萄糖,KCl,酵母浸膏,醋酸钠,琼脂,蒸馏水,5%孔雀绿水溶液,%番红水溶液,95%乙醇,%美兰水溶液。

酒精灯,载玻片,盖玻片,显微镜,双层瓶(内装香柏油和二甲苯),擦镜纸,接种环,烧杯,试管等。
2实验步骤

麦氏(Meclary)琼脂培养基的配方如下:
成分
葡萄糖
KCl
酵母浸膏
醋酸钠
琼脂
蒸馏水
含量

.

4g
200mL
113℃灭菌30min。

、1g蛋白胨、2g葡萄糖加入100ml水配制成液体培养基。

无菌操作由酿酒酵母麦氏琼脂斜面培养物挑取菌种,在已冷凝好的斜面培养基上划线接种。

在28℃条件下恒温培养7d。

%吕氏碱性美蓝染液,无菌操作法取培养基中培养的酵母菌少许,放在吕氏碱性美蓝染液中,使菌体与染液均匀混合。用镊子夹盖玻片一块,小心盖在液滴上。

将制好的水浸片放置3min后镜检。先用低倍镜观察,然后换用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽情况,同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。30min后再次观察。

在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴无菌水,用无菌操作方法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀,涂成薄膜。

待涂片自然干燥后,让菌膜朝上,通过火焰2~3次进行固定(以不烫手为宜)。

加5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位,染色1~。

用缓流自来水轻轻冲洗,直至流出的水无色为止。

用95%的乙醇脱色