文档介绍：抗凝剂的选择
概述
使用全血和血浆检查,通常采集静脉血,需要使用抗凝剂。所谓抗凝,是用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性,以阻止血液凝固。这种能够阻止血液凝固的物质,称为抗凝剂或抗凝物质。检查的项目不同,所使用的抗凝剂也不同。
实验室常用抗凝剂
乙二***四乙酸(EDTA)盐
草酸盐
肝素
枸橼酸盐
乙二***四乙盐(EDTA)
常用其钠盐(EDTA-Na2-H2O)或钾盐(EDTA-K2-2H2O),能与血液中钙离子结合成螯合物,而使ca2+失去凝血作用,从而阻止血液凝固。
Na2C10H14O8N2+Ca2+ CaC10H12O8N2+2Na++2H+
EDTA盐对血细胞形态和血小板计数影响很小,适用于多项血液学检查,尤其是血小板计数,但钠溶解度明显低于钾盐,有时影响抗凝效果。EDTA-K2特别适用于全血细胞分析及血细胞比容测定,室温下6h,红细胞体积不改变。根据国际血液学标准化委员会(ICSH)1993年文件建议,血细胞计数用EDTA-K2作抗菌素凝剂,用量为EDTA-K2-~。EDTA影响血小板聚集,不适合于作凝血象检查和血小板功能试验。
EDTA在检验中的几点注意事项
1. 抗凝剂浓度过高,渗透压上升,会造成细胞皱缩。EDTA溶液pH与盐类关系较大,低pH可使细胞膨胀。EDTA-K2可使红细胞体积轻度膨胀,采血后短时间内平均血小板体积非常不稳定半小时后趋于稳定。
2. EDTA-K2使 Ca2+、Mg2+下降,同时使肌酸激酶、碱性磷酸酶降低,EDTA-,如果血少,中性粒细胞会肿胀分叶消失,血小板会肿胀、崩解,产生正常血小板的碎片,使分析结果产生错误。
3. EDTA由于能抑制或干涉纤维蛋白凝块形成时纤维蛋白单体的聚合,不适于血凝和血小板功能检测,也不适用于钙、钾、钠及含氮物质的测定。
4. 此外,EDTA能影响某些酶的活性和抑制红斑狼疮因子,故不适合制作组化染色和检查红斑狼疮细胞的血涂片。
5. EDTA也可影响到中性粒细胞的形态学特征。这种变化取决于外周血涂片制备的时间和EDTA的浓度。即使EDTA浓度在最佳浓度-,也会引起中性粒细胞发生微小的形态学变化。这种变化首先包括中性粒细胞肿胀、分叶结构的消失,随后发生胞浆颗粒的丧失及核和胞浆出现空泡。在标本采集后1-3h间,发生核肿胀,核染色质发生交叉,3h后,中性粒细胞结构模糊并发生碎裂。,中心粒细胞及乎全部发生碎裂。
6. 单核细胞也可发生类似的与时间相关及与EDTA浓度相关的形态学变化,但在程度上轻于中性粒细胞。血小板同样会发生变化,包括肿胀,产生巨血小板,后者发生碎裂后可产生与血小板大小一致的碎片,用电子计数仪计数时导致血小板假性升高。用EDTA作抗凝剂时血小板从盘型变为球形,从而使平均血小板体积测定结果不准确。
草酸盐
常用的有草酸钠,草酸钾和草酸铵,它们溶解后离的草酸根与标本中的钙离子形成草酸钙沉淀,使Ca2+失去凝血功能。
Na2C2O4 + Ca2+ CaC2O4 + 2Na+
草酸盐抗凝的优点是溶解度好,价廉。2mg草酸盐可抗凝1ml血液。,与血液按1:9比例使用,过去主要用于凝血象检查。实践发现,草酸盐对凝血V因子保护功能差,影响凝血酶原时间测定;另外由于草酸盐与钙结合后形成的沉淀物,影响自动凝血仪的使用,因此,多数认为,凝血象检查选用枸椽酸钠为抗凝剂更为适宜。高浓度钾离子或钠离子易使血细胞脱水皱缩,而草酸铵则可使血细胞膨胀,故测定血细胞比容时用草酸铵和草酸钾或草酸钠两者适当比例混合的抗凝剂,恰好不影响红细胞的形态和体积。
草酸盐在检验中的几点注意
若用草酸钾或草酸钠作抗凝剂,与肝素为抗凝剂测定的血细胞比容比较,测定值可降低8%~13%,此时的血浆量也相应增加;用它测定血浆中化学成分,结果可低5%左右。
标本中如加入高浓度的草酸盐抗凝剂,可发生溶血和改变血液pH,干扰血浆中的钾,钠和***测定,还能抵制有些酶的活性。
由于生成草酸钙沉淀,红细胞会出现锯齿状,白细胞出现空泡,淋巴细胞及单核细胞会变形,不宜做血片检查。
草酸盐可使血小板聚集,并影响白细胞形态,不能用于白细胞和血小板分类计数。
肝素的一般特性
肝素是生理性抗凝剂,广泛存在于肺,肝,脾等几乎所有组织和血管周围肥大细胞和嗜碱性粒细胞的颗粒中。它是一种含硫酸基团的粘多糖,相对分子质量15000,带有较多负电荷。抗凝机制较为复杂,主要是加强抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)灭活丝氨酸蛋白酶的作用,从而阻止凝血酶的形成,并有阻止血小板聚集等多种抗凝作用。此外,肝素还能借助