文档介绍：生化与分子生物学技术
中山医学院
生物化学与分子生物学教研室
实验八:不连续聚丙烯酰***凝胶电泳
一、不连续聚丙烯酰***凝胶电泳
实验操作及注意事项
实验分组(每人做一管,每组配一份胶)
 认清试剂(试剂和吸管对号、量器的使用)
 
封管
 
分离胶配制与灌胶(浓度为6%,化学聚合,每组总体积为10ml,灌胶高度为7~8cm)
封正丁醇3mm(手法、高度、观察界面变化和判断凝固、时间掌握15min)
P147:
注意事项:
1、封管要严,防止漏液。
2、固定玻璃管要竖直,防止夹碎。
3、每组配一份胶,试剂与移液管对号,准确加量。
4、配胶后立即灌胶(用滴管灌胶,用后立即清洗)
5、正丁醇沿管壁缓缓加入
浓缩胶配制(浓度为3%,光聚合,每组总体积为8ml,,留1cm空隙加样)
 
倒掉正丁醇
灌浓缩胶
 
封正丁醇3mm(观察界面,判断凝固时间)
 
安装电泳槽(结构、原理、电流及电极的方向、不漏水、除气泡)
注意事项:
1、倒掉正丁醇,用滤纸吸干再灌浓缩胶。
2、配胶后立即灌胶(用滴管)
3、灌胶后立即清洗滴管,防止胶凝固于管中。
4、撕掉封口膜,用胶塞将玻璃管固定于电泳槽上(竖直,防漏)
5、加电极缓冲液(注意液面)
加buffer 样品处理并加样(20ul) 电泳(浓缩胶时3mA/管,分离胶时2mA/管,距底1cm时停止)剥胶
固定(时间5min)
染色(时间2min)
漂洗脱色至背景透亮
二、电泳基本原理及相关知识