文档介绍：作物杂志 Crops 2012 11
甘蓝型油菜成熟籽粒 DNA 快速提取方法探讨
谢景梅刘晓兰曲存民卢坤吕俊李加纳
( 西南大学南方山地农业教育部工程技术中心, 400716 , 重庆北碚)
摘要以室温保存不同年份的甘蓝型油推广面积已达到油菜总生产面积的 50% 以
菜种子为材料, 采用改良的 CTAB 法和 DNA 抽提上[ 2 -3 ] 。同时, 在种植的转基因作物中, 油菜占
试剂盒分别提取甘蓝型油菜籽粒 DNA, 探讨适合到约 5% [ 4 ] , 在转基因食品的安全性及对生态环
甘蓝型油菜籽粒 DNA 提取的方法。结果表明, 境的安全性方面还存在诸多问题需要解决。因
不同保存年份种子提取的 DNA 含量无显著差此, 为确保种子销售之前快速得到正确的鉴定结
异; 受种皮色泽的影响也较小; 用改良的 CTAB 果, 避免不合格种子流入市场, 建立一种作物快
法比试剂盒所提 DNA 产量高, 结构完整性好, 成速检测的方法具有十分重要的现实意义。分子
本较低。 PCR 扩增检测结果表明两种方法获得标记技术具有信息含量丰富, 检测不受季节、环
的 DNA 均能满足一般的分子实验。因此, 从油境影响等优点[ 5] , 是目前最先进的遗传标记系
菜干籽粒中直接提取 DNA 可以节约时间, 显著统。目前用于油菜 DNA 提取的方法有 SDS 法、
提高工作效率, 为快速高效地进行甘蓝型油菜种 CTAB 法、高盐低 pH 法和快速试剂盒法。也有人
质资源和遗传多样性分析奠定了基础, 同时, 也针对油菜基因组 DNA 常规提取方法的不足, 对
利于快速鉴定推广品种是否带有外源基因。[ 6 -9 ]
提取程序进行改良, 目前用于 DNA 提取的
关键词甘蓝型油菜种子基因组改
; ; DNA; 材料多是油菜叶片, 在油菜生长期达到 20 ~ 30 d
良 CTAB 法; 试剂盒
取材效果较好, 但这个过程需要较长的时间, 用
油菜种子进行发芽鉴定一般也需要 5 ~ 6 d, 这时
油菜( Brassica napus L1) 属十字花科芸薹属,
幼苗较小, 需要的种子量较大, DNA 提取样品损
在世界油料作物中占有重要地位, 是世界四大油
失也较大、提取效率比较低, 且随着储存年份的
料作物( 大豆、向日葵、油菜、花生) 之一, 也是我
延长, 种子的发芽率会降低, 种子的需要量自然
国最主要的油料作物[ 1] 。目前, 进一步改良油菜
增加, 因此不利于该方法在种子快速检测中推广
品种的目标就是在优质的基础上, 利用杂种优势
使用。本研究以 10 个不同保存年份的甘蓝型油
来充分发掘其增产潜力, 并且在我国杂交油菜的
菜品种的干种子、双蒸水浸泡 6h 和 12 h 的种子
作者简介: 谢景梅, 硕士, 主要从事油菜育种研究
李加纳为通讯作者, 教授, 研究方向为作物遗传育种为实验材料, 采用 CTAB 法和北京全式金公司的
原理与方法 DNA 抽提试剂盒分别提取甘蓝型油菜成熟籽粒
基金项目: 农业部油菜现代产业技术体系( nycytx - 00504 ) ; 重庆市
重点项目( CSTC, 2010AA1014 ) ; 中央高校基本科研业务