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582 南方医科大学学报(J South Med Univ) 2011;31(4)
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基础研究
三种示踪技术标记人脂肪组织来源干细胞的对照研究
李科成,常强,鲁峰
南方医科大学南方医院整形外科,广东广州 510515
摘要:目的比较3种不同的荧光示踪技术标记人脂肪组织来源干细胞(ASCs)的效率,以寻找脂肪组织来源干细胞最佳的
标记示踪方法。方法吸脂术获取人脂肪组织,胶原酶消化法后体外贴壁法培养,获得的长梭形细胞经鉴定为脂肪组织
来源干细胞。分别使用5 μl DiI,10 μg/ml的脱氧尿苷BrdU 及50 MOI的携带绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒进行标
记,荧光显微镜观察不同时间点及不同代数的脂肪干细胞的标记效率及形态变化。结果成功分离获得ASCs,经鉴定其
表达间充质干细胞表面标志,并能被成功实现成脂、成骨及成软骨的诱导分化。DiI 标记ASCs 48 h 后,荧光显微镜下观察
可见100%细胞浆呈现红色荧光,胞核未染,保持了良好的正常形态。但细胞传代后荧光衰减迅速。10 μg/ml BrdU标记
ASCs 48 h后,90%的胞核呈绿色荧光,传代后胞核荧光逐渐衰减。携带GFP重组腺病毒转染ASCs 24 h后胞浆内即可见
绿色荧光,5 d后90%以上的细胞呈现绿色荧光。反复传代后未见明显的荧光衰减。结论 DiI,BrdU 及携带GFP的重组
腺病毒均能有效的标记人脂肪组织来源干细胞。DiI 示踪技术为细胞膜标记,BrdU为细胞核标记,两项技术均操作简单,
但传代后衰减迅速,适合于短期标记示踪。携带GFP的腺病毒标记方法较为复杂,但反复传代后仍不衰减,适合于长期的
标记示踪观察。
关键词:脂肪组织来源干细胞;标记示踪;DiI;脱氧尿苷;绿色荧光蛋白
中图分类号:R45 文献标志码:A 文章编号:1673-4254(2011)04-0582-05
Comparison of the efficiency of three techniques for labeling human adipose-derived
stem cells
LI Ke-cheng, CHANG Qiang, LU Feng
Department of Plastic Surgery, Nanfang Hospital, Southern Medical University , Guangzhou 510515 , China
Abstract: Objective To explore the optimal methods for labeling human adipose-derived stem cells (ASCs). Methods
ASCs were isolated by collagenase digestion and density gradient centrifugation, and their cell surface markers and
ability to differentiate into the adipogenic, chondrogenic, and osteogenic lineages were