文档介绍：中国人兽共患病学报

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蛋白质组学主要实验技术的研究进展
蔡冬冬,王秀荣。,石霖。,武嘉男,陶乐蒙。‘,王馥梅,包红梅。,陈化兰。
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人类基因组计划, 和技术,可以有效地去除血浆白蛋白及等高丰
的完成,极大推动了后基因组时代的到来。度蛋白而相应富集了血浆中剩余的低丰度蛋白,从
基因数量有限性和结构相对稳定性与生命现象复杂而增加分离及检测的蛋白点数,明显提高了
性和多变性之问的巨大反差,使人们的目光逐渐从分离效率。最近,又出现了一些新的蛋白质分离技
基因组学转向蛋白质组学,作为生命活动执行者,基术,如多维色谱技术、亲和色谱技术和毛细管电泳
因组编码的所有蛋白质随之成为研究热点。等。其中最有发展前景的是多维色谱技术,该技术
年澳大利亚大学的和最突出的优点是对全蛋白质组分进行分析时的歧视
等第一次提出了蛋白质组概效应大大减小,而且可以实现蛋白质分离与鉴定的
念,“”是由蛋白质与基因组在线联用,有利于蛋白质组研究的自动化和高通量
两个词的杂合,意指“一种基因组所表达的全化。虽然有一些局限性,但仍是目前大规
部蛋白质”,即包括一种细胞乃至一种生物所表达的模分离蛋白的最有效手段。
全部蛋白质。蛋白质组学内容包括鉴定蛋白质的表生物质谱技术
达、存在方式修饰形式、结构、功能和相互作用质谱技术,常与双向
等。人们要更好的研究蛋白组学,就要有足够的电泳等蛋白质分离技术联用,它具有灵敏度、准确
技术支持,所以双向电泳、生物质谱、蛋白芯片、酵母度、自动化程度高的特点,是蛋白质鉴定的核心技
双杂交系统、生物信息学等蛋白质组学的各种实验术。年,发明了质谱,在随后的几十
技术逐步发展起来,下面本文对蛋白质组学主要实年里,质谱技术逐渐发展成为研究、分析和鉴定生物
验技术研究进展进行介绍。大分子的前沿方法。到世纪年代中期,出
双向电泳技术现了以电喷雾电离和基质辅助激光解析电离
双向电泳—,一为代表的软电离技术,即样品分子电离
是蛋白质组学研究中最常用的技术,具有简便、时,保持整个分子的完整性,不会形成碎片离子。通
快速、高分辨率等优点。年,意大利生化学家过肽质量指纹谱、肽
’发明了双向电泳技术,大大提高了蛋白序列标签和肽阶梯序列
质分离的分辨率而得以广泛应用,至今经历了多等方法,结合蛋白质数
年的发展,双向电泳技术已较为成熟。目前主要应据库检索可实现对蛋白质的快速鉴定和高通量筛
用的是等建立的固相梯度的凝胶电泳选,拓展了质谱的应用范围,形成了一门新技术一生
—,于年发展了一种更物质谱技术。
宽的胶条,碱性范围达到了,这种电泳具有生物质谱由于离子源和质量分析器的不同,产
分辨率高、上样量大、重复性好的优点,并且可与质生了电喷雾离子化飞行时间质谱——技
谱联用对蛋白质进行鉴定。术、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱—
也有明显的局限性:如重复性差;自动化—技术等多样的生物质谱技术。采用
程度低,费时费力;对过大和过小——测定肽指纹图谱是当前蛋白质组
的分子量的蛋白质、低丰度蛋白质—研究的常用鉴定方法,无需纯化蛋白,可同时鉴定多
、极酸或极碱和难溶的蛋白质如膜蛋白等分离
困难。近些年来人们针对