文档介绍：血清谷丙转氨酶测定1、原理转氨作用:将α-氨基酸的氨基通过酶促作用转移到α-酮基上,生成相应的酮酸与氨基酸的反应。催化这一反应的酶称为转氨酶。转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、肾等组织中,谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)的活性均较高。在正常的新陈代谢过程中,血清内两种酶维持一定水平的转氨酶活性(即正常值)。血清谷丙转氨酶测定当肝、心、肾等组织发生病变时,由于组织细胞肿胀、坏死导致大量的酶释放到血流中,从而引起血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活性显著升高。因此测定这些酶的活性对某些疾病的临床诊断具有重要的参考价值。本试验用丙氨酸和α-酮戊二酸为底物(基质液成分)经血清谷丙转氨酶作用生成谷氨酸及丙酮酸。丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用生成2,4-二硝基苯腙,此物在碱性条件下呈棕红色。根据棕红色的深浅与同样处理的丙酮酸标准液进行比较,即可计算出酶的活性。其反应过程如下:H3NO2NHNNO2+丙酮酸-2,4-二硝基苯腙棕红色,520nm处具特征光吸收,颜色深浅(OD520值)与丙酮酸含量成正比,可据此进行比色测定。2,4-H2CH3COOHCO(CH2)H2(CH2)2COOH++谷丙转氨酶AlaGluα-KG丙酮酸血清谷丙转氨酶测定King氏法谷丙转氨酶活性单位:每毫升血清在37℃,生成1umol丙酮酸为一个活力单位。,报告数据以100ml血清计算,因此实际侧得结果乘1000即可。2、实验材料及试剂实验材料:动物或人血清实验试剂:丙酮酸标准液要求临用前配制;其它试剂的配制见P188。3、试验结果的处理血清谷丙转氨酶测定⑴、标准曲线的制作以表1中的A520为纵坐标,酶活性单位为横坐标,绘制标准曲线。⑵、样品中转氨酶活性的计算a、标准曲线测定法根据样品管的A520(已减去空白管的)查标准曲线,即得每100ml血清中转氨酶的活性单位数。b、标准管测定法根据表2数据按下式计算酶活力:样品管A520AⅣ-AⅢGPT活性单位数/100ml血清=×200=×200标准管A520AⅡ-AⅠ血清谷丙转氨酶测定⑶、回收率计算实际测得值(样品+标准测得值)AⅤ-(AⅠ+AⅢ)/2回收率/%=×100=×100理论计算值(AⅡ–AⅠ)/2+(AⅣ–AⅢ)/2(样品+标准计算值)/2