文档介绍：编号:0402030205
毕业论文(设计)
题目:CUC3基因RNA干扰载体
对烟草的转化及鉴定
院(系) 化学与环境工程学院
专业生物工程
学生姓名 xxx
成绩
指导教师 xxx (职称) 教授
指导教师 xxx (职称) 研究员
2008年6月
诚信声明
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毕业论文(设计)作者签名:
签名日期: 年月日
摘要
采用叶盘法通过已导入了构建好的表达载体的根癌农杆菌,对野生型烟草叶片进行转化。烟草叶片在分化培养基MS + NAA + 6-BA + 50mg/L Hyg + 500mg/L Cb上4周后分化出芽;在生根培养基MS + mg/L IBA +250mg/L Cb上,1-2周后形成根;叶片β-葡萄糖甘酸酶(GUS)组织化学染色,阳性率为75%;通过PCR 检测潮霉素磷酸转移酶(HPT)基因的DNA序列,获得14个阳性株系。在烟草转化阳性株系中获得了2种表型:叶片融合和叶片缺失。
关键词∶根癌农杆菌;GUS组织化学染色; 聚合酶链式反应( PCR)
Abstract
Agrobacterium with expression vector transformed the leaves of Nicotiana tabacum. Regenerated shoots were formed in 4 weeks when the leaves of N. tabacum cultured on shoot-inducing medium MS medium supplemented with NAA, 6-BA, 50mg/L Hyg and 500mg/L Cb. Shoots rooted on the root induction medium MS medium supplemented with IBA and 250mg/L Cb in 1-2 weeks. β-glucuronidase(GUS) histochemical assay indicated that the GUS positive rate was 75%. PCR analysis of gene Hygromycin phosphotransferase(HPT) gene indicated that there were 14 positive lines. There were 2 distinct phenotypes in the positive lines: leaf fusion and leaf pleteness.
Keywords:Agrobacterium tumefacien; GUS staining; polymerase chain reaction (PCR)
目录
第一章前言 1
烟草概述 1
烟草的生物学研究 1
烟草的遗传转化研究进展 1
2
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用根癌农杆菌进行基因转化的植物 3
RNA干扰 4
RNA干扰的定义 4
siRNA基因沉默原理 4
RNA干扰在植物中的应用 4
CUC3(Cup-Shaped Cotyledon3)基因 6
常用分子生物学实验方法 6
GUS基因检测——组织化学染色法 6
基因组DNA提取(CTAB法) 7
PCR技术 8
琼脂糖凝胶电泳 8
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第二章材料与方法 12
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方法 16
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第三章结果与讨论 20