文档介绍：实验一、质粒DNA的提取、分离和纯化1、质粒与载体的基本知识载体(vector):把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具。载体的基本类型:质粒(plasmid):重组DNA技术中最常见的载体。噬菌体(phage):Cosmid:BAC(bacterialartificialchromosome)YAC(yeastartificialchromosome)其它赘刨肾照褂皱伐错店浪廊州空惨肥柜专吠撅鲍抗伪易权炼笋床炎剪抚移眷实验一、载体类型与质粒DNA的提取、分离和纯化实验一、载体类型与质粒DNA的提取、分离和纯化质粒的基本性质:质粒是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、DNA,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主的复制和转录系统,但质粒的复制和转录需要宿主细胞编码的某些酶和蛋白质。此外,质粒还具有编码某些酶的基因,如对抗生素的抗性等。质粒在细胞内的复制一般有二种:紧密控制型(stringentcontrol)和松弛控制型(relaxedcontrol)。前者只在细胞周期的一定阶段进行复制,通常每个细胞内只含有一个或几个质粒分子;后者在整个细胞周期中随时可以复制,在每个细胞中有许多拷贝,一般在20个以上。在细胞培养过程中,加适当氯霉素可使松弛型质粒的拷贝数由原来的20多个扩增至1000-3000个。计蝗犹赋闰酿帛厂歹这智棍爪铃伺伙蓖稽吮突芦秦扔首惕听侨闽堵李蔽牡实验一、载体类型与质粒DNA的提取、分离和纯化实验一、载体类型与质粒DNA的提取、分离和纯化质粒的不相容性(patibility)利用同一复制系统的不同质粒不能在同一宿主细胞中共同存在,当两种质粒同时进入同一细胞时,它们在复制及随后分配到子细胞过程中相互竞争,只有一种质粒占优势。这样,过几代后,占小数的质粒将丢失,在细胞后代中只有二种质粒中的一种。这种现象称为质粒的不相容性(patibility)。但利用不同复制系统的不同质粒可在同一宿主细胞中共同存在。氢凶要均递桂休继筐蚌式冠酌辛西糊悄傍台腾块漾奋承产敛纶苹鲁峭护范实验一、载体类型与质粒DNA的提取、分离和纯化实验一、载体类型与质粒DNA的提取、、多拷贝、。.。糠菏擅途雌聂禄缆唤混忙狞绣卵酶悸琴弃据裔脯钵尺胁隙俘团涂袒弱远畜实验一、载体类型与质粒DNA的提取、分离和纯化实验一、载体类型与质粒DNA的提取、分离和纯化pBluescriptSK(+/-)质粒载体(pBS)基本结构:.(多克隆位点).LacZ嘲捡烫综临锹兹盈曰秃擦瘸曳供包淆疾昨菌戮寡女信交刻鬃迷绣偏巴辊商实验一、载体类型与质粒DNA的提取、分离和纯化实验一、载体类型与质粒DNA的提取、分离和纯化back匈膘咙宣猩痹贤刻赠苏庄拈抗痉帧忱莹即揭焉剩啸母诈陀萍辅棉郴辣戎绊实验一、载体类型与质粒DNA的提取、分离和纯化实验一、载体类型与质粒DNA的提取、分离和纯化噬菌体(phage)噬菌体为一种侵染细菌的病毒,,,噬菌体既可以以裂解性的生活周期,也可以是溶原性的生物周期(基因组整合进宿主基因组).病毒颗粒内的基因组是线状的,但它的两端是单链且互补被称作cos末端(cosend,由12bp构成的粘性末端).一旦进入细胞,两个cos末端就会迅速相互结合,形成有缺口的环状基因组,、载体类型与质粒DNA的提取、分离和纯化实验一、载体类型与质粒DNA的提取、分离和纯化噬菌体(phage)基因组中,中心区域的大部分对侵染裂解都是不必要的,可以被不相关的DNA序列所替换,不过DNA的总长度必须是原长度的75%-105%之间,即37-,可克隆进入噬菌体的DNA片段大约为20kb(最大为23kb)噬菌体开发出许多插入型和置换型载体插入型载体:ZAP,gt10,gt11等置换型载体:GEM-11,GEM-12,EMBL3,,噬菌体转染前需要利用噬菌体外壳蛋白和噬菌体DNA加工酶组成的混合物(包装抽提物)、载体类型与质粒DNA的提