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微生物检验实验室基本要求知识点.doc

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微生物检验实验室基本要求知识点.doc

上传人:1557281760 2019/1/22 文件大小:350 KB

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微生物检验实验室基本要求知识点.doc

文档介绍

文档介绍:病毒是一类体积微小、结构简单、具有严格的寄生于活细胞的微小生物,它们具有下列几种基本特征:1、病毒的基本结构是由核酸(基因组)与蛋白质组成,由DNA或RNA组成核心,外有一蛋白外壳(核壳),有些病毒在核壳外面另有一层脂蛋白组成的包膜包围着。2、病毒只在活细胞中增殖,因为病毒缺乏完整细胞器等必要装置,所以必须依赖宿主细胞提供高分子合成装置和能量。3、病毒非常微小,无细胞结构,绝大多数不能用光学显微镜检查,而必须用电子显微镜才能察见。核酸化学:DNA是脱氧核糖核酸的英文缩写。RNA与DNA差别在核糖2'位带有一个羟基。DNA①DNA起储存遗传信息作用,并以核苷酸排列顺序形式储存遗传信息。②由4种核苷酸组成DNA分子,由碱基互补维持DNA双螺旋结构。③在动植物、细菌、真菌中都含有DNA,但在病毒中(非细胞型微生物)不一定含DNA。④DNA为长丝状分子互相纠缠,其溶液十分粘稠。⑤它对紫外线有最强的吸收,通常用260nm波长测DNA溶液浓度,它在近中性环境中带负电核,DNA变性后OD值会升高。⑥因DNA不溶于乙醇,常用二倍量沉淀DNA⑦在变性温度时,它的粘性突然降低。⑧淬火是为了保持DNA单链状态。DNA变性后溶液慢慢冷却,DNA会自动恢复双螺旋结构。说法错误的:(1)DNA和RNA的化学结构碱基G与C通过2对氢键配对构成DNA分子说法错误的。(2)与DNA分子相比,RNA分子难水解的看法也不对。(3)许多质粒可在宿主之间进行转移的说法是不对的。形状:(1)TRNA二级结构呈三草形。(2)在细胞内RNA分子中rRNA占比例最大。(3)DNA二级结构中呈左手双螺旋的是Z构象。DNA结构、性质:在真菌中网崎片段一般为100~200核苷酸。噬菌体核酸最常见的是双链线状DNA。反式作用因子具有的DNA识别或DNA结合域,主要有螺旋/转折/螺旋(T/H/T),锌指结构,碱性-亮氨酸拉链(bZIP),碱性-螺旋/环/螺旋(bH/L/H)。真核生物中的瑞粒酶是由RNA和蛋白质构成的。一般真核生物染色体上有5种主要的组蛋白,其中亲和力最强的两种是H3H4。DNA的复制和修复:(1)细胞每分裂一次,染色体DNA就合成一次,新DNA是按原DNA分子合成。(2)DNA分子拆(ca)开成两条链,依每一条单链合成一条新单链,成为半保留复制。(3)在合成DNA时限制性核酸内切酶不是合成DNA的必要条件。(4)DNA多聚酶只能结合在一长段DNA单链的一小段局部双链结构上,才能顺利开始DNA合成。(5)在DNA合成中单核苷酸分子必须顺序以共价链连接在已形成核酸链3,末端的羟基上。(6)在合成发生错误时,DNA多聚酶会切除错误核苷酸,在那个位置上重新加一个正确核苷酸。(7)在人工合成DNA时,只加一种或两种三磷酸单核苷酸,那么合成就会停止在缺失的核苷酸位置上。在大肠菌DNA损伤修复时填补缺口最重要的酶是DNA聚合酶Ⅰ。DNA三个终止密码子分别是UAA、UAG、UGA。在大肠菌中DNA复制最主要的DNA聚合酶是DNA聚合酶Ⅲ。该酶的核心聚合酶中,具有3,-5,外切酶活性的亚基是逖腔£在体内染色DNA复制时必须有RNA引物。在哺(bu)乳动物细胞中负责合成线粒体DNA是DNA聚合酶r。RNA酶Tl可特异地作用于嘌呤核苷酸3,端磷酸并切割与相邻核苷酸相连的磷酸二酯键。体内DNA复制与体外PCR不同的是引发酶参与。与体内DNA复制不相关酶是反转录酶。在细胞内DNA合成正常进行是RecA蛋白,而RecA蛋白不具有蛋白酶活性。在大肠菌DNA聚合酶Ⅰklenow片段没有5‘-3‘外切酶活性。DNA修复过程中尿嘧啶糖基酶系统不包括Sl核酸酶。在逆转录酶的RNAaseH活性是一般DNA聚合酶所不具备的。在逆转录酶的最终产物双链DNA的长度较正链RNA稍长。转录:在生物体内,RNA合成过程称为转录。它(RNA)是按照储存在DNA上遗传信息合成。合成RNA时DNA双链也要解旋,解旋部位称启动子。去掉RNA分子5,末端的磷酸,不起合成酶功能的作用。在刺激点突变,改变某些基因功能与DNA向RNA转移无直接关系(?)(1)大肠菌的RNA聚合酶由5个亚基,其笱腔衅舳幼饔谩£(2)利福平作用该酶(聚合酶)庋腔稀£(3)RNA聚合酶Ⅰ主要是转录rRNA(构成核糖体骨架的是rRNA)。Prt-mRNA内含子的5,-末端一般是GU。(4)RNA聚合酶Ⅱ主要是转录hnRNA。在真核基因启动子近侧序列元件中,对转录起点定位起关键作用的是TATA盒。(5)放线菌素D能抑制DNA转录。编码核糖体RNA的基因是一种中度重复序列的DNA序列。翻译:在合成各种不同RNA中:(1)tRNA具有搬运氨基酸功能。构成核糖体骨架的是rRNA。mRNA直接决定蛋白质的结构。(2)合成蛋白质需4种核苷酸,排列组成遗传信息,然