文档介绍：原代细胞培养实验 ---小鼠胚胎成纤维细胞培养指导教师:费晓方2014年6月掌握无菌操作技术。掌握组织细胞的消化与分散。熟悉原代细胞培养的一般方法与步骤。熟悉小鼠解剖操作技术。实验目的和要求:选择大约一半足孕时间的胚胎,10-13天龄胚胎含有最大数量的未分化的间质细胞,胚胎成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。每组小鼠胚胎2-5个动物的选择:实验材料:每组的超净台中有以下物品:(或DMEM)培养液1瓶;8ml小牛血清(FCS)1瓶;%胰蛋白酶1瓶;PBS(-)(生理型磷酸盐缓冲液);3、50ml离心筒2个4、灭菌培养皿1个,细胞培养瓶1个4、1ml,200μl移液器各1支;枪头盒2个;无菌玻璃搅拌棒1个5、细胞计数板1块;6、灭好菌的镊子1把,剪刀1把;7、酒精灯1台;试验操作步骤:1)胚胎的分离。适用哺乳动物(仓鼠、小鼠和大鼠)。%乙醇擦洗整个动物。,用无菌镊子将皮肤扯向后腿。,取出含有胚胎的子宫,置于无菌的培养皿上。,将胚胎放于无菌的含有无菌PBS(-)的100ml烧杯中。,去掉PBS(-)。继续用PBS(-)漂洗胚胎直至清洗液清亮为止。2)将2-5个胚胎转移至一个小的无菌培养皿中,用新的无菌剪刀小心地绞碎胚胎,用PBS漂洗。3)在无菌状态下,将绞碎的胚胎转移于一50ml的无菌离心筒中,%的无菌胰蛋白酶,用搅拌棒轻轻搅动。4)在温暖的环境中或置于37°C培养箱中轻轻摇动15分钟。5)让存留的组织块在重力作用下慢慢沉降,将含有悬浮细胞的液体转移至一无菌50ml的离心管中,该管内按照每10ml上清加入lml小牛血清的比例加入牛血清以灭活,胰蛋白酶。6)加人新鲜胰蛋白酶溶液(见前述步骤)于含有