文档介绍：*转基因植物的检测鉴定方法选择和报告基因/标记基因的检测转基因植物的PCR检测外源基因整合的Southern杂交鉴定外源基因转录的Northern杂交检测外源基因表达蛋白的检测生物学鉴定*1、选择基因检测主要观察转化子在添加相应抗生素或除草剂培养基上的生长抗的存活,不抗的死亡*NPTⅡ活性检测目的:检测NPTⅡ基因在植物组织中的表达原理:NPTⅡ使ATP分子上的Ύ-P转移到抗生素分子上,影响抗生素与核糖体的结合,从而使抗生素失活。检测时使用放射性标记的[Ύ-32P]ATP,通过Ύ-磷酸基团转移,生成放射性的卡那霉素来检测。检测方法:点渍法,层析法,凝胶原位检测法NPTⅡ提取物+[Ύ-32P]ATP→32P磷酸化的卡那霉素→放射自显影*2、报告基因检测GUSß-葡萄糖苷酸酶基因产生蓝色物质GFP绿色荧光蛋白基因产生绿色荧光LUC荧光酶素基因发射光子*gus基因的检测gus基因编码ß-葡萄糖苷酸酶基因,该酶是一种水解酶,能催化许多ß-葡萄糖苷酯类物质的水解。检测常用底物有3种:5-溴-4-氯-3-吲哚-ß-D-葡萄糖苷酸酯(X-Gluc)4-甲基伞形酮酰-ß-D-葡萄糖醛酸苷酯(4-MUG)对硝基苯-ß-D-葡萄糖醛酸苷(PNPG)检测方法:组织化学染色定位法X-Gluc荧光法测定GUS活性4-MUG分光光度法测定GUS活性PNPG*组织化学染色定位法检测GUS以X-gluc为底物,在适宜条件下该酶将底物水解成蓝色物质,*gfp基因的检测绿色荧光蛋白是一些腔肠动物所特有的生物荧光素蛋白。生物荧光素蛋白是指存在于生物体内,能在激发光作用下发射出荧光的蛋白质。它可与目的基因构成嵌合基因,从报告基因的表达了解目的基因表达情况。检测方法:对于转化细胞可用蓝光照射,在显微镜下分拣发出强烈绿色荧光的细胞。对于转化植株,可在激发光照射下利用解剖照相系统进行绿色荧光蛋白检测和定位。**不含有OSPK1基因的原生体pUC-GFP含有OSPK1基因的原生体pUC-OSPK1-GFP转化对照质粒的原生质体整个细胞有绿色荧光,而转化含有OSPK1基因质粒的原生质体的绿色荧光则主要在细胞的质膜上GFP在水稻原生质体中的瞬时表达结果