文档介绍：山西医科大学
博士学位论文
机械性创伤诱发大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡机制的研究
姓名:戴文娟
申请学位级别:博士
专业:呼吸内科
指导教师:刘卓拉
2011-05-10
山西医科大学博士学位论文
机械性创伤诱发大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡机制的研究
摘要
研究目的:
1 建立机械性创伤大鼠模型;TNF-a、肾上腺素损伤大鼠模型;拉贝洛尔干预大鼠模型。
2 观察机械性创伤时肺组织中 FoxA1 mRNA 和蛋白质的表达改变及肺组织中肺泡Ⅱ型上
皮细胞的凋亡。
3 观察 TNF-a、肾上腺素对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞 FoxA1 mRNA、蛋白质表达的影响及大
鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的凋亡。
4 研究 TNF-a、肾上腺素对大鼠肺组织中 FoxA1 mRNA、蛋白质表达的影响及大鼠肺泡Ⅱ
型上皮细胞的凋亡。
研究方法:
1 机械性创伤对大鼠肺组织 FoxA1mRNA 和蛋白及大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响
建立非致死性机械性创伤模型:麻醉大鼠后,将其置于 Noble-Collip 创伤仪(直径 12
英寸),以 40 rpm 的转速,旋转 200 圈,造成大鼠非致死性创伤。以 ELISA 法检测大鼠
血清中 TNF-a、肾上腺素含量;使用实时荧光定量 PCR 和免疫蛋白印迹检测创伤组和伪创
伤组大鼠肺组织 FoxA1 mRNA 的表达的变化;对大鼠肺组织切片进行 TUNEL 和肺泡Ⅱ型
上皮细胞特异性标志物 SP-C 染色检测大鼠肺组织中凋亡的肺泡Ⅱ型上皮细胞。
2 TNF-a、肾上腺素体内实验对肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响
建立 TNF-a、肾上腺素损伤离体细胞模型:100ng/mlTNF-a 和 2000ng/ml 盐酸肾上腺
素刺激大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞。运用荧光定量 PCR、免疫蛋白印迹检测 TNF-a、肾上腺素
对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞 FoxA1 mRNA、蛋白质表达,同时运用流式细胞术检测大鼠肺泡
Ⅱ型上皮细胞的凋亡。
3 TNF-a、肾上腺素体内实验对肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响
建立 TNF-a、肾上腺素损伤大鼠模型:向大鼠腹腔分别注射 TNF-α()、盐酸
肾上腺素(1ml/kg);拉贝洛尔干预模型:在给大鼠灌胃盐酸拉贝洛尔后 3h、6h、24h 后
再放入 Noble-Collip 创伤仪以 40 r/min 转动 200 圈造成机械性创伤。运用免疫蛋白印迹检
测这三种模型中大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞 FoxA1 蛋白质表达,通过 TUNEL 和 SP-C 免疫组
化染色对比,检测大鼠肺组织中肺泡Ⅱ型上皮细胞的凋亡,同时运用 ELISA 法检测三种大
鼠模型中血清中 TNF-a、肾上腺素含量。
研究结果:
1 机械性创伤对大鼠肺组织 FoxA1mRNA 和蛋白及大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋
亡的影响
机械性创伤对大鼠分泌肾上腺素和 TNF-α的影响
以 ELISA 法检测大鼠血清中 TNF-a、肾上腺素含量,创伤后各时间点血清中肾上腺素
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和 TNF-α含量逐渐上升,分别于创伤后 6h 和 3h 达高峰,峰值为(±)ng/ml
和 ±(ng/l),差异有统计学意义(P<)
机械性创伤致继发性肺损伤对 FoxA1 mRNA 和蛋白质表达的影响
使用实时荧光定量 PCR 和免疫蛋白印迹检测创伤组和伪创伤组大鼠肺组织 FoxA1
mRNA 的表达的变化。结果显示创伤组 FoxA1 mRNA 表达较伪创伤组增高,FoxA1 蛋白
表达在创伤组均高于伪创伤组,于创伤后 24h 达到高峰(P<)。
机械性创伤对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响
TUNEL 和肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性标志物 SP-C 染色结果表明大鼠创伤后出现肺泡Ⅱ
型上皮细胞凋亡。
2 TNF-a、肾上腺素对离体大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响
TNF-a、肾上腺素对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞 FoxA1mRNA 的表达影响
使用实时荧光定量 PCR 和免疫蛋白印迹检测各组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞 FoxA1 mRNA
和蛋白质的表达的变化。结果显示盐酸肾上腺素、TNF-a 刺激后 FoxA1mRNA 和蛋白表达
明显上升,24 小时达到高峰。差异有统计学意义(P<)。
TNF-a、肾上腺素对肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响
采用流式细胞术检测了 100ng/mlTNF-a 和 2000ng/ml 盐酸肾上腺素刺激大鼠肺泡Ⅱ型
上皮细胞后的凋亡率,结果表明,两组刺激 12 小时后大鼠肺泡Ⅱ