文档介绍：缩略词表缩略词英文全名ACEAngiotensinconvertingenzymeACE2Angiotensinconvertingenzyme2RASReninAngiotensinSystemAoAngiotensinogenAngIIAngiotensinIIAngIAngiotensinIARBAngiotensinIIR1receptorantagonistACEIAngiotensinconvertingenzymeinhibitorMFMyocardialFibrosisRT-o'sModifiedEagle'sMedium1上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:日期:年月日上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□,在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名:指导教师签名:日期:年月日日期:年月日上海交通大学博士学位论文中文摘要局部肾素血管紧张素系统中ACE2对心肌纤维化的影响(中文摘要)第一部分研究目的以往围绕肾素血管紧张素系统(ReninAngiotensinSystem,RAS)对心肌纤维化影响的研究多是分别用不同的RAS组分去干预成纤维细胞,或在动物整体水平去观察相应的变化。由于RAS各组分之间是一个相互影响的网状体系,单用某个RAS组分去干预往往不能全面地反映RAS的影响。动物整体水平研究则不可避免地将局部RAS和循环RAS混杂在一起,难以阐明局部RAS的作用。因此体外构建局部RAS对这一研究将是非常有利的。本研究拟从基因和代谢的角度验证体外构建局部RAS对大鼠心肌纤维化影响体外模型的可行性。研究方法原代培养新生SD大鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞;用RT-PCR鉴定大鼠心肌细胞、心肌成纤维细胞和大鼠H9C2细胞RAS各组分基因的表达;用放免法检测依那普利阻断血管紧张素转换酶(ACE)后心肌细胞培养基中血管紧张素II(AngII)的量是否有变化,结合Western-blot验证ACE2的存在,进一步确定局部RAS的存在;以Transwell共培养心肌细胞和心肌成纤维细胞构建局部RAS影响心肌纤维化的体外模型。同时验证大鼠H9C2细胞替代大鼠心肌细胞的可行性。研究结果在心肌细胞和H9C2细胞中均检测到RAS各组分基因的表达,但在成纤维细胞中未发现肾素和ACE2的表达。对心肌细胞用依那普利干预后AngII呈剂量依赖性地下降,10-7mol/L组(+)与对照组(+)有明显统计学差异(P<);对H9C2细胞用依那普利干预后AngII也具有相似的下降趋势,与对照组(+)相比10-7mol/L组(+)和10-8mol/L组(+)均有明显降低(P<)。以Transwell共培养心肌细胞和成纤维细胞,在***沙坦存在的情况下培养基中AngII含量(+)较单纯心肌细胞加***沙坦组(+)明显升高(P<);H9C2细胞和成纤维细胞在***沙坦存在情况下,共培养体系中AngII含量(+)较单纯H9C2细胞加***沙坦组(+)也明显升高(P<)。Western-blotting证实心肌细2上海交通大学博士学位论文中文摘要胞和H9C2细胞在蛋白水平均有ACE2的表达。研究结论以Transwell体外共培养心肌细胞和心肌成纤维细胞能够建立一个用于研究局部RAS对心肌纤维化影响的体外模型,大鼠心肌细胞系H9C2细胞能够替代心肌细胞构建共培养体系。第二部分研究目的ACE2能够直接降解AngII,也是体内唯一的直接针对AngII的降解酶。而AngII对高血压的发生、发展以及靶器官损害起到关键性的作用。因此,调控ACE2的表达借以研究其对AngII的影响对理解RAS的作用机理有重要意义。但目前能够下调ACE2表达的手段尚不多。本研究设计、合成针对大鼠心肌H9C2细胞的siRNA对ACE2