文档介绍：:..人体细胞应对银纳米颗粒和咖啡因胁迫刺激下XPF作用的探湖南省湖南大学生物学院湖南长沙410000摘要:本论文使用化学还原法合成银纳米颗粒(Silvernanoparticles,AgNPs),通过透射电镜鉴定了其形态大小。为了探宄XPF的作用,选用XPF棊因点突变的XP-F细胞和正常人体细胞L02细胞作为实验对象,测定生存率,发现AgNPs具有细胞毒性,与咖啡因共同作用能够明显增加毒性作用。咖啡因加入后,SOD2的转录在XP-F细胞屮发生丫降低,使得XP-F细胞缺少应对AgNPs引起的氧化压力的能力。在咖啡因刺激下,L02细胞中p53下游基因hRRM2B、MDM2和p21的转录降低,XP-F细胞的这三种基因转录均无变化;WesternBlot结果表明XP-F细胞屮p53(Serl5)磷酸化水平稳定,L02细胞屮p53(Serl5)磷酸化水平极低难以检测,这说明XPF基因涉及人体细胞的p53调控网络,并通过降低p53蛋白的活性从而抑制p53K游基因的转录。关键词:银纳米颗粒;咖啡因;XPF;p53;核苷酸还原酶;ROSAgNPs独特的抗菌及粒子特性[1],在医药医疗、口用化妆等方面的应用口渐广泛,但多数金属纳米粒子对哺乳动物细胞都具有毒害作用[2]。而咖啡因又是多种药物、饮食屮重要添加成分,有研究发现咖啡因可促进细胞受到紫外线刺激后的凋亡[3],减少肿瘤的发生[4]。但暴露于AgNPs的刺激卜,同时摄入咖啡因,对人体细胞的影响尚属未知。有研究报道AgNPs可以与人体DNA链结合,阻碍细胞正常复制和转录[2,5],其产生的活性氧自由基(ROS)也会直接攻击DNA及线粒体等细胞组分[6LXPF又是DNA核苷酸切除修复方式的重要因子[7]。本论文通过使用XPF基因点突变的XP-F细胞,以人体正常细胞L02为对照,探究丫XPF在人体细胞应对AgNPs与咖啡因的刺激卜发挥的作用。(人宫颈癌上皮细胞)和L02(人正常肝脏细胞)购自中国科学院细胞库;XP-F(XPF基因点突变成纤维细胞)购自美国模式培奍物集存库(Americantypeculturecollection,)。所脊细胞系均按照说明使用含脊10%胎牛血清的培养液常规培养。,加热至沸腾,,反应至溶液变棕绿色。使用透射电子显微镜(日本精工)拍照观察。,接种至培养皿,加入咖啡因和AgNPs处理48ho培养14天左右,%结晶紫染液染色计数。(Invitrogen)法提取RNA。根据PrimeScriptRNA逆转录试剂盒(Takara)进行逆转录反应。(Rox)焚光定量PCR预混液说明书进行。引物设计如下:,使用AgNPs与咖啡因处理XP-F细胞L02细胞48h,结果表明L02细胞对AgN