文档介绍：实验十
细菌生化实验
一、实验目的
1、证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同,从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2、掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。
3、了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。
4、掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
5、了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。
二、实验原理
1、微生物对生物大分子的分解利用
淀粉水解:淀粉酶
油脂水解:脂肪酶
明胶液化:蛋白酶
石蕊牛乳试验:产酸、产碱、胨化、酸凝固等。
2、糖发酵试验
产酸:溴甲酚紫指示剂
大肠杆菌:
产气肠杆菌:
产气:杜氏小管检测
大肠杆菌:
产气肠杆菌:
3、IMViC试验
IMViC试验
吲哚试验:
***红试验():
伏-普试验(乙酰***甲醇试验):
柠檬酸盐试验:
色氨酸酶:色氨酸→吲哚+对二***氨基苯甲醛→玫瑰吲哚(红色)
大肠杆菌:
产气肠杆菌:
产酸能力:强,***红变红;弱:***红不变色
大肠杆菌:阳性
产气肠杆菌:阴性
葡萄糖→***酸→乙酰***甲醇→2,3-丁二醇
乙酰***甲醇→OH-→二乙酰+精氨酸的胍基→红色化合物
大肠杆菌:阳性
产气肠杆菌:阴性
能否利用柠檬酸作为碳源
大肠杆菌:阴性
产气肠杆菌:阳性
三、实验材料
1、菌种:枯草芽孢杆菌,大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),普通变形杆菌(Proteus vularis),产气肠杆菌。
2、培养基:固体油脂培养基,固体淀粉培养基,明胶培养基试管,石蕊牛奶试管,尿素琼脂试管、葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试管各3支,普通变形杆菌(内装有倒置的德汉氏小管) ,蛋白胨水培养基,葡萄糖蛋白胨水培养基,柠檬酸盐斜面培养基,醋酸铅培养基。
3、溶液或试剂:革兰氏染色用卢氏碘液(Lugol’s iodine solution),***红指示剂,40% KOH,5% α-萘酚,***,吲哚试剂等。
4、仪器或其他用具:无菌平板,无菌试管,接种环,接种针,试管架。
四、实验步骤
1、细菌水解大分子物质试验
淀粉水解试验
培养基:淀粉培养基平板
菌种:大肠杆菌和枯草芽孢杆菌
方法:平板上划“十”字接种
注意:接种前在平板底部作记号;“十”字不要太大
油脂水解试验
培养基:油脂培养基平板
菌种:大肠杆菌和金黄色葡萄球菌
方法:平板上划折线接种
注意:接种前在平板底部作记号
明胶液化试验
培养基:试管明胶培养基
菌种:大肠杆菌或产气肠杆菌
方法:穿刺接种
注意:20℃培养
石蕊牛乳试验
培养基:试管石蕊牛乳培养基(2支)
菌种:粘乳产碱菌或铜绿假单胞菌
方法:斜面划线接种
注意:观察结构注意牛乳产酸、产碱、凝固、胨化现象是连续出现的。
四、实验步骤
1、细菌水解大分子物质试验
2、糖发酵试验
培养基:葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基(内装杜氏小管)(各3支)
菌种:大肠杆菌和产气肠杆菌
方法:分别接种于葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基
四、实验步骤
1、细菌水解大分子物质试验
2、糖发酵试验
3、IMViC试验
IMViC试验
试验名称
培养基名称
菌种名称
接种方式
接种
管数
吲哚试验
蛋白胨水培养基
大肠杆菌和产气肠杆菌
液体
1
***红试验
葡萄糖蛋白胨培养基
液体
1
伏普试验
葡萄糖蛋白胨培养基
液体
1
柠檬酸盐试验
柠檬酸盐培养基
斜面
1
五、实验报告
1、分别记录试验菌种对淀粉水解、脂肪水解、明胶液化、石蕊牛奶及尿素试验的结果。以“+”表示阳性,“-”表示阴性。
2、记录大肠杆菌及普通变形杆菌对葡萄糖和乳糖的发酵试验结果。以“+”表示产酸或产气,“-”表示不产酸或不产气。
3、记录大肠杆菌和产气杆菌的吲哚试验、***红试验、伏-普试验、柠檬酸盐试验及硫化氢试验结果,以“+”表示阳性反应。“-”表示阴性反应。
4、不利用碘液,你怎样证明淀粉水解的存在?