文档介绍：维生素D测定方法维生素D的测定方法,目前只有“婴幼儿配方食品和乳粉通用检验方法”介绍的GB/-1997所列的先正相收集,后反相分离的HPLC测定方法。,但操作比较烦琐,对于维生素的营养素补充剂,样品中杂质干扰小,,并参照GB/-1997与GB/-2003(食品中维生素A和维生素E的测定)。一、原理样品中维生素D经热皂化处理后。用HPLC紫外检测,内标法定量。二、仪器1、HPLC:water公司,510泵,486紫外检测器,三锐色谱工作站。2、超声波振荡器3、水浴箱4、、试剂1、维生素D3标准对照品:精确称取维生素D3标准对照品(sigma公司),配成100μg/ml的标准D3贮备液。2、维生素D贮存一般较稳定,贮备液也可在264μn下按常规的标定方法用比吸光系数计算出维生素D3的标准浓度。维生素D3比吸光系数E1%cm=493。3、其他试剂:无水***,无水乙醇,无水硫酸钠,甲醇,抗坏血酸,氢氧化钾,内标苯并e芘……等同GB/-2003或GB/-1997四、方法1、,,加10%抗坏血酸5ml,样品先混成均匀的糊状,再加无水乙醇30ml同1:1氢氧化钾溶液10ml在沸水上皂化10分钟,使皂化完全,皂化后立即放入冰中冷却。2、提取、洗涤、浓缩等步骤同GB/-2003,最后用无水乙醇定容至2ml。五、色谱条件“1、流动相:甲醇:水=:、分析柱:KromasilC185μ250×、紫外检测器波长:264nm(→264nm→292nm转换。4、进样量10μl5、流速:、计算:常规内标法定量注:本实验条件的出峰和检测波长转换顺序:检测波长出峰时间维生素A:’±内标苯并e芘:’±维生素D3:’±维生素E:’±叶酸测定方法一、原理:样品中的叶酸用稀氨水提取,用HPLC反相分离后紫外检测,外标法定量。二、仪器1、HPLC:、486紫外检测器、三锐色谱工作站。2、PH计:ORIONSA7203、超声波提取器4、水浴箱5、、试剂磷酸二氢钾(AR);氢氧化钾(AR);氨水(AR);甲醇(色谱醇);叶酸标准对照品(sigma公司)纯度>98%四、色谱条件“1、流动相:,氢氧化钾()70m