文档介绍：南开大学
硕士学位论文
中酸和生物素多克隆抗体的制备及其ELISA检测方法的建立
姓名:张太昌
申请学位级别:硕士
专业:微生物学
指导教师:郗日沫
2012-05
中文摘要背景:叶酸和生物素都属于逦兀晕只宓纳砉δ苡兄匾W用。随着食品工业的发展和人们对营养保健食品需求程度的日渐提高,市场上出现了添加维生素的婴儿配方食品、果汁和谷物产品等维生素强化食品。对于这些食品,必须控制其维生素含量。尤其对婴幼儿食品和孕妇及乳母食品来说,维生素的定量分析在食品营养分析中占有重要地位。为保证食品标签标注维生素含量的准确性,美国虴//都制定了一系列法规来检测维生素强化食品中的维生素含量,我国国家标准/裁魅饭娑硕杂び锥称泛腿槠分形睾康募觳狻依据目前我国国家标准,维生素分析方法有微生物法、高效液相色谱法和荧光法,方法比较单一,与实际需求有一定差距。微生物法操作繁琐,耗时长;荧光分析法虽然灵敏度高,但其稳定性和选择性在某些样品检测中仍然有待提高;法具有稳定、快速等优点,但其缺点在于仪器设备昂贵,且样品的前处理较为复杂,不适合成分复杂、杂质干扰大的样品测定,难以用于现场操作。因此急需研究和建立一种高效、准确、经济实用的维生素含量检测方法。目的:酶联免疫检测法芄豢朔撤椒ǖ牟蛔悖哂屑虮恪⒖速、准确等优点,非常适合作为食品安全分析技术,因此研究开发一种酶联免疫分析法来检测食品中叶酸和生物素的含量具有重要意义。方法:针对叶酸和生物素的结构特点,我们利用ê突旌纤狒ê铣了叶酸、生物素的免疫原和包被抗原,用叶酸和生物素免疫原分别免疫新西兰大白兔获得其多克隆抗体。然后利用间接ú舛ㄒ端岷蜕锼乜固宓男价、灵敏度、特异性等,以及考察了建立的间接ㄔ谑导恃分械募觳限、准确度和精密度等。结果:,线性范围为~,相比于食品营养强化剂使用卫生标准泄娑ǖ囊端崽砑恿婴幼儿食品~,孕妇、乳母专用食品。,完全能够满足检测的需求。特异性方面,,和其他药物.、
的交叉率均较小.。在牛奶、奶粉和饮料中的检测限分别为.。.~,~,最低检测限为~,线性范围为泄娑ǖ纳锼靥砑恿婴幼儿食品.~,饮液.,完全能够满足检测的需求。在牛奶中的检测限为~,%范围内,:通过本课题的研究,我们成功制备了叶酸和生物素的完全抗原及其多克隆抗体,分别建立了用于检测食品中叶酸和生物素含量的酶联免疫检测法,为开发商品化的优质国产试剂盒奠定了良好的基础,并为其它维生素抗体的制备和酶联免疫检测方法的开发开辟了道路。关键词:叶酸,生物素,多克隆抗体,~,相比于~,.
甌甒琣琫篈,.//.籬.,.,,甌/珿,
%.篢篺,,.瑃—·琣瑃~,~.一—甌%.~.叫.,.ァ%.%.篒甪甌.,,,,....
符号说明
酬牵第一章序言第一节叶酸和生物素概述。叶酸在年由最先合成并阐明其化学结榭¨。⒍园被郊酸、劝彼峤岷隙桑剖堑9劝彼,简写为人证明叶酸能够治疗恶性贫血叶酸在各种动植物组织内广泛存在,但含量不高。为了满足机体的需求,人们常通过维生素强化食品来补充叶酸。世界卫生组织建议成人的叶酸补充量为癵/天,孕妇和乳母为/天。我国国家标准中规定叶酸含量在婴幼儿食品中为襨ǎ谠懈竞腿槟甘称分形¨美国年已开始在谷物食品中强化叶酸,娑ü任锸称非炕端崃课.~。随后加拿大、澳大利亚等很多国家也开始推行叶酸强化。我国在婴幼儿食品、孕妇及老年食品中均有强化叶酸。.叶酸的生理功能叶酸经叶酸还原酶生成有生理活性的四氢叶酸,作为辅酶成分,起着一碳单图叶酸的结构~。
氯搿ā儿碱等破坏㈣。广泛应用于饮料食品、维生素制剂、医药等领域。位传递体的作用,与许多重要的生化过程密切相关【】:参与嘌呤和嘧啶的合成;参与氨基酸间的转化,促进蛋白质合成;参与血红蛋白及肾上腺素等的合成;促进红细胞的生成;参与高半胱氨酸的转化等等。.叶酸缺乏症和过量副作用体内叶酸缺乏会导致很多缺乏病症:细胞铣杉跎伲鹁抻缀煜赴性贫血【】;孕妇摄入叶酸不足时,胎儿易发生先天性神经管畸形浚灰⒏同型半胱氨酸血症;妊娠妇女体内的叶酸水平和婴儿的出生体重显著相关,同时孕妇的叶酸水平和流产、早产的发生率相关;引发消化系统炎症和癌症的发生;还会引起生长不良、头发变灰、舌头发炎等,甚至会精神萎靡,智力退化等。一般情况补充过多叶酸不会引起中毒,多余叶酸可以通过尿液排出体外,通常不会引起任何健康问题。但如果长期过量补充叶酸,可能会出现以下副作用:厌食等胃肠道症状;可能引起锌缺乏症状,锌缺乏会导致胎儿发育迟缓、先天