文档介绍：山东省医学科学院
硕士学位论文
微小隐孢子虫表面抗原CP23基因、CP15/60-23复合基因载体的
构建、表达及其保护性的研究
姓名:宰德富
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:刘克义
20060501
日期:礁生年垃日甽;日期:冱亟年羔月丝日日期:夕伊倌辏对隆s萌≯学位论文独创性声明学位论文知识产权权属声明申请专利等权利。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论本人声明,所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文中引用他人的成果,均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果,,、复制、公开阅览、借阅以及文或成果时,:导师签名:』
微小隐孢子虫表面抗原基因、/春匣蛟体的构建、表达及其保护性的研究”中文摘要研究生:宰德富专业:病原生物学导师:刘克义芯吭.。于年发现的另一种虫种微小隐孢子虫引起的隐孢子虫病且恢秩蛐缘娜诵蠊不技纳娌。可引起严重胃肠炎并伴有水样腹泻,导致大量体液丢失而危及生命。该病已被小剂量ジ腥炯亮縄%为雎涯的微小隐孢子虫卵囊足以引起血清呈阴性的健康自愿受试者感染。由于隐孢子虫卵囊体积微小本⒎植广泛,常规氯化饮水消毒方法不能将其杀灭,故对人类公共卫生造成很大威胁。,,,江苏、浙江、安徽、福建、内蒙古、止,对该病尚无有效的防治措施,因此对该病的早期诊断、,减隐孢子虫且恢质粲诙ザ烁春衔锩诺募纳栽妫予年首先在实验小鼠胃肠道内发现的∈,其有效虫种有种,,虽可引起急性腹泻,但常为自限性;免疫力低下、功能缺陷或免疫抑制的患者缬幼儿、艾滋病患者、营养不良者、器官移植后、%左右,长期的严重腹泻,,国外暴发流行时有报告,多发生于病人或病牛接触后的人群,或幼儿园和托儿。哪谴伪┓⒅校,用袢旧狭怂剐海滤多人,云南、四川、山东及上海等省市均已证实有该病存在,其感染率为%%。自从发现隐孢子虫以来,许多研究者一直致力于该病的防治研究,但迄今为”嗣家自然科学基金资助项目钅勘嗪牛∞—啼雌~■￡唬,’』.“●
少损失,,实验室鉴定和检测隐孢子虫的主要方法有消化道粘膜活检法、体外培养法、病原学检查法、,或者费时易交联,底物稳定,,,因隐孢予虫与其它原虫一样,隐孢子虫虫体小,获取高纯度的虫体抗原较难等因素影响了检测的敏感性和特研究者对微小隐孢子虫各生活期中与致病和免疫有关的蛋白进行了筛选,诊断、免疫预防及免疫治疗的靶抗原,并且联合应用活性较高的两种不同抗原/诤系鞍祝灾刈榈鞍捉写炕图ǎ徊⒂闷涿庖咝∈螅鄄斓本研究的主要方法、结果及结论’⑿∫哂璩媛涯业拇ù⒎掷氪炕捅4免疫功能,灌胃接种微小隐孢子虫卵囊×觯使小鼠感染,收集小鼠粪便,用改良抗酸染色法确定感染成功,用改良不连续蔗糖密度梯度离心法纯结果:成功建立了微小隐孢子虫感染的/∈蠖锬P停惺笛樾鼠均感染,从接种炱鹣蛱逋馀懦雎涯遥桓牧伎顾崛旧ǚɡ堵躺ū尘跋旅倒红色的卵囊清晰可见;不连续蔗糖密度梯度离心法获得了大量纯度较高的有活力的卵囊,适合于免疫学和分子生物学使用:液氮中保存潞蟮穆涯胰匀荒费力难以控制逋馀嘌,或者敏感性和特异性不高≡Ъ觳榉,。经济,特别是应用碱性磷酸酶标记,催化速度快,稳定性高,容抗原成分复杂,真正有诊断意义的抗原成分在整个虫体中占的比例较少;并且异性,限制了其实际应用。因此,解决隐孢子虫特异抗原的问题成为解决隐孢子虫的检测与诊断的关键技术问题。,将编码表面抗原和/的基因构建在同一原核表达载体上,高效表达和它们都能刺激机体产生高滴度的特异性