文档介绍：(一)。原理是,操作水平是水平。优点:;定向地改造生物的遗传性状。2.“分子手术刀”——,主要从中分离纯化出来,能使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的断开,其特点具有性。经限制酶切割产生的DN***段末端通常有两种形式:、。·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶都缝合。E·coliDNA连接酶只能连接末端;而T4DNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较。:①能够稳定保存并;②有一至多个酶切位点③含有,便于筛选。④对受体细胞无害。最常用的载体是,其它载体:。5基因工程的基本操作程序、、、。、。PCR是的缩写,原理。此外如果基因比较小,核苷酸序列也已知,可以通过直接人工合成。、、、。标记基因的作用。8将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是,其次还有、等。将目的基因导入动物细胞最常用的方法是。此方法的受体细胞多是。9将目的基因导入微生物细胞,其转化方法是:先用处理细胞,使其成为,再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成过程。,用相应的抗体进行。有时还需进行生物学水平的鉴定。,将药用蛋白基因与等调控组件重组在一起,通过等方法导入哺乳动物的受精卵中,然后将受精卵送入母体,使其生长发育为转基因动物,该动物能够分泌乳汁来生产药物。,蛋白质工程师在的基础上,延伸出来的第二代基因工程。基本途径是:从预期的蛋白质功能出发→设计预期的→推测应有的序列→找到相对应的序列。(二)(1)原理:。(2)过程:的植物器官、组织或细胞经过培养出愈伤组织,愈伤组织在一定的培养条件下为幼根和芽。常用的植物激素和。:,需要的酶有、;诱导融合的方法:物理法包括等。化学法是用作为诱导剂。、、、,其中是其他技术的基础。16..动物细胞培养的流程:取动物组织块→剪碎→用或处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶处理分散成单个细胞继续培养。,称为。细胞数目不断增多,当贴壁细胞分裂生长到表面接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为。,以防培养过程中的污染。培养基成分有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐等。通常需加等天然成分。细胞培养所需气体中O2是细胞代谢所必需的,CO2的主要作用是。(比较容易)和核移植(比较难)。,原理是。诱导动物细胞融合方法与植物原生质体融合方法类似,常用的诱导因素有、、等。动物细胞融合的意义:克服了,成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。:给小鼠注射→分离出融合()培养基培养骨髓瘤细胞→:既能大量,又能产生。单克隆抗体的优点:。(三)