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中国农业科学 2011,44(8):1533-1542
Scientia Agricultura Sinica doi: .0578-
华山新麦草α-醇溶蛋白基因的克隆及原核表达
王玉卿,赵继新,庞玉辉,降彦苗,陈新宏,武军,刘淑会
(西北农林科技大学农学院,陕西杨凌 712100)
摘要:【目的】克隆华山新麦草(Psathyrostachys huashanica)的α-醇溶蛋白基因,并对其进行生物信息
学分析,构建该基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。【方法】采用同源克隆法从华山新麦草基
因组 DNA 中分离克隆出α-醇溶蛋白基因并进行序列分析,将克隆的华山新麦草α-醇溶蛋白基因 Gli-Ns-5 克隆到
表达载体 pET-28a(+)上,获得重组质粒 pET28a-Gli-Ns 转化大肠杆菌 BL21(DE3)并诱导表达。【结果】从华山新麦
草基因组 DNA 中克隆了 4 个α-醇溶蛋白基因:Gli-Ns-2(FJ713595)、 Gli-Ns-3(GQ139525)、 Gli-Ns-4(GQ139526)
和 Gli-Ns-5(GQ139527)。序列分析表明,4 条序列具有α-醇溶蛋白的典型结构特征,含有 8 个或 9 个半胱氨酸
残基,序列 FJ713595 为假基因。利用所构建的大肠杆菌表达载体,经 IPTG 诱导,华山新麦草α-醇溶蛋白基因
Gli-Ns-5(GQ139527)可在原核系统中特异性表达。Western-blot 证实融合蛋白可成功表达。【结论】克隆了 4
个华山新麦草的α-醇溶蛋白基因序列,基因 Gli-Ns-5(GQ139527)可在原核表达系统中成功表达,为小麦品质
改良提供了新的候选基因。
关键词:华山新麦草;α-醇溶蛋白;基因克隆;序列分析;原核表达
Cloning and Prokaryotic Expression of α-Gliadin Gene from
Psathyrostachys huashanica
WANG Yu-qing, ZHAO Ji-xin, PANG Yu-hui, JIANG Yan-miao, CHEN Xin-hong, WU Jun, LIU Shu-hui
(College of Agronomy, Northwest A&F University, Yangling 712100, Shaanxi)
Abstract:【Objective】 The present study aimed at cloning and analyzing the α-gliadin genes from Psathyrostachys
huashanica and expressing it in .【Method】The α-gliadin genes were amplified from P. huashanica by AS-PCR and then the
cloned gene Gli-Ns-5 was inserted into pET-28a(+). The